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葡萄糖浓度对体外培养胰岛的分泌功能的影响 吕秀菊 丛 威 傅德贤 欧阳藩 (中科院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京353信箱，100080) 摘要 本文在体外培养的原代小民肤岛水平详细考察了培养基中荀萄特浓度对于波岛素分泌水平和旋 岛对荀萄村的利嗽响应教感性指数 (StimulatedResponseIndez,SRI)的形响，明确在22.2.M荀萄林浓 度环境培养48hr造成肤岛素分泌水平和SRI位的不可逆损伤，建立了在高葡萄枯浓度下映岛功能顿伤 模型。 关性词 枪尿病 从岛 蔺萄粉 功能报伤模型 前盲 搪尿病、癌症和心血管疾病是目前世界上爆发率最高的慢性病。随着经济的发展，糖尿病 患者呈现日益增多的趋势，全世界目前有搪尿病病人约1.3亿，这个数目预计到2050年将达到3 亿W。我国近年来，随着人民生活水平的提高，饮食结构和生活方式的改变，糖尿病患者数目显 著);升。糖尿病患者中有85%以上均为II型糖尿病。II型糖尿病发病是与胰岛素抵抗和胰岛素 分泌缺陷密切相关的。目前比较普遍的观点认为高血糖是加重胰岛素分泌缺陷的直接原因f2]，长 期高血糖环境促进了胰岛细胞的功能衰竭，临床表现出高血糖和胰岛素分泌水平下降的典型糖 尿病症状。 细胞培养是现代病理研究和化合物药效筛选的有力手段。细胞培养具有成本低、周期短的 特点，能够在生命结构的基本单位— 细胞水平反应生理、生化特性，在细胞水平实验获得的 结果对于临床有直接的指导意义。本文以体外培养的原代小鼠胰岛为手段，详细考察了培养基 中葡萄搪浓度对于胰岛素分泌水平和胰岛对葡萄搪的刺激响应敏感性指数 (StimulatedResponse Index,SRI)的影响，建立了在高葡萄搪浓度下胰岛功能损伤模型。 1 实脸材料和方法 1)昆明种小鼠:北京大学医学部实验动物中心 2)胎牛血清:天津市川页生化制品有限公司 3)RPMI一1640培养基:GibcoCo，补充1001U/ml的青霉素和100mg/ml的硫酸链霉素和10% (v/v)的胎牛血清。 4)葡萄糖:分析纯，北京化学试剂二厂 5)96孔塑料培养板:NUNCLONBrandProducts(Denmark) 6)Poly一L一lysine:北京经科试剂公司，Sigm。进口分装 7)小鼠胰岛分离和纯化:参考文献l3] 8)胰岛素检测:放射免疫分析l41 9)胰岛素放免分析检测试剂盒:原子能科学院同位素研究所 10)p计数器:Ff一630G型，北京核仪器厂 11)SRI值测定:胰岛依次在27.8mM葡萄糖浓度和3.3mM葡萄糖浓度分别培养2hr，所测得 相应胰岛素含量的比值为SRI值。 2 实验结果与讨论 2.1体外长期培养时葡萄枪浓度对于肤岛素分泌水平和SRI值的影响 按照世界卫生组织规定IsJ，正常人空腹血糖浓度范围在7.OmM以下，当任意时刻检测血糖 浓度高于11.1mm时即可确诊为糖尿病。实验中考察了葡萄糖浓度在5,5一27.8mM的范围内，体 745 外培养胰岛的胰岛素分泌水平，和培养第1,3,5天时胰岛对于葡萄糖刺激的响应值 (SRI)。实 验结果如图1和图2所示。为了排除由干胰岛个体差异和接种时每孔中胰岛数目不同造成的影 响，卖‘验中胰岛素水平均采用相对值来表达。即实验开始时检测在同一葡萄糖浓度下培养一定 时间各孔内胰岛素水平。并将此绝对值作为该孔的胰岛素水平基准，以后各实验条件下，检测 得到的胰岛素水平与基准值比较所得到的比值代表该实验条件下的胰岛素分泌水平。 今 6 0 ﹄ 6 0 一-F 5.5mM 内 4 0 一 5 5 - 11mm 岛 内 ‘ 0 ︵ 一 卜 5 0 佗 今 ‘ 0 0 仍 男 8 a