Ce4在红豆杉细胞中的亚细胞定位研究及其在细胞信号转导中的作用初探.pdfVIP

Ce4+在红豆杉细胞中的亚细胞定位研究 及其在细胞信号转导中的作用初探1 梁世乐李景川元英进2 (天津大学生物《t；-r系天津300072) 摘要：透射电子显微境和x一射线能谱研究表明：外加元素讳主要分布于红豆杉细胞的细胞壁与细胞 膜上，在扭嚣检测是教度范围内胞质与洼地中未检测到元素缔；元素钙主要存在于液泡中的致密体 内．推曩i认为ce“促进了ca2+的内流，液泡作为钙库接纳内流ca“． 关t词：ce“红豆杉细胞定位ca“ 中田分类号：Q257 文娃标祝码：^ 前言 稀土对植物的次生代谢具有调控作用。确定稀土在细胞中的分布是深入研究其调控机制的一 个重要前提。研究者们在这方面进行了大量工作，但所得结论并不一致。部分研究表明稀土可进 入细胞质…，且在细胞器中有分布…：部分研究认为稀土不能通过细胞膜进入细胞内部H。“。作 者研究发现在培养基中外加Ce4+可引起细胞液泡及细胞膜和细胞壁上出现高电子密度致密体，据 此推测Ce4+进入细胞，且主要贮存于液泡中Ⅲ。为验证这一推测，本文利用透射电子显微镜和能 谱相结合技术对胞内致密体成分进行了分析，给出了稀土在红豆杉细胞中分布的初步证据。 1材料与方法 1．1细胞株系及培养 VaF，mairei) cMnesis 实验用细胞株系为中国科学院植物研究所提供的南方红豆杉(Taxus 重)，于25C，100rpm，黑暗培养。 1．2实验设计 将悬浮均一、稳定的南方红豆杉细胞Y．902系平均接种于改良B5培养基中，培养至第九天 分别加入硝酸铈铵、硝酸铵和硝酸钠溶液，保证实验组与对照组间只存在Ce+差异，实验组中 7，20，72-148h 5．8。24h后取样进行电镜观测与能谱分析，0-3t Ce4+浓度为Immm01．L～，pH 取样分析培养基中c矿浓度。 l，3电镜样品制备 细胞样品在2．5％戊二醛一磷酸缓冲液中前固定，再用l懈酸一磷酸缓冲液后固定2h，酒精逐 渐脱水，双氧环丙烷过渡，然后渗透、包埋，LKBV型超薄切片机切片，经醋酸双氧铀和柠檬酸 SEM400ST下观察照相，进行能谱分析。 铅染色后，在philips l_4培养基中Ca”测定 运用全自动贝克曼(beckmau)生化分析仪C—X7△测定。 2结果与讨论 l国家自然科学基金(批准号和教育部跨世纪优秀人才计划资助 2通讯联系人 576 图3显示的是经ce“处理的红豆杉细胞液泡中含有高电子密度致密体，其形状规则，体积较 大，自＆谱分析表明其主要成分有元素Ca、C1．无元素Ce(图7)。 图4显示的是经Ce”处理的红豆杉细胞不仅液泡中含有高电子密度致密体，而且在细胞膜与 细胞壁上同样分布着高电子致密体，只是体积小。能谱分折表明其主要成分有元素Ce、Cl，无元 素Ca(图8)。 图5显示的是经ce”处理的红豆杉细胞胞浆中散落有高电子密度致密体，能谱分析表明其主 要成分有元素Cl，无元素Ce和Ca，但含有微量元素Fe(图9)。 此外采集了非电子致密区数据(图6)，此区域含有元素Cl，但无元素ca和Ce(图10)。 由图ll可见，Ce”的加入引起胞外Ca2+浓度在72小时内急剧下降。 3n。 2．50 ■ 2仰 j j 一。 ； 罢 2”。 8 。翮 ；日