蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体制备及其体外靶向性研究.pdfVIP

蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体制备及其体外靶向性研究 胡海洋‘陈大为1乔明曦‘赵秀丽1刘彦仿2 1沈阳药科大学药学院，110016；2第四军医大学基础医学院病理教研室，710032 摘要目的： 制各蜂毒多肽空问稳定免疫脂质体，并考察其体外靶向性。方法采心薄膜超卢法制备蜂蓐多肤空问稳定免疫 腊质体，使用流式细胞仪．荧光显微镜卜观察蜂毒多肽空间稳定免疫脂质体与肿瘤圳胞的作Hj。MTT法考察了蜂毒多肽空 间稳定免疫脂质体对不同肿瘤细胞的体外杀伤作用。结果蜂毒多肽卒削稳定免疫脂质体足通过抗体介导的细胞内化进入{}}| 胞内；蜂考多肽宅问稳定免j童脂质件对SMMC一7721细胞具有显著的杀伤作用，而刘非肝癌圳胞无显著的杀协作用。结论蜂 毒多肽空问稳定免疫脂质体是一种柏效的靶向制剂．具有广泛的应用前景。 关键词：蜂毒多肽；空问稳定免j垒脂质体；流式细胞仪；MTT法 近年来，蜂毒多肽所具有的抗肿暗活性已引起大晕研究者的注意，但它强烈的溶血性所产生的毒副作 用限制了它在临床上的广泛应用。众多降低蜂毒多肽毒副作用的方案中，蜂毒多肽脂质体足最有希望的一 种。尽管脂质体在肿瘤治疗中是一种能够降低药物毒副作用的药物传递系统…，但传统脂质体只能使极少 量的药物被动传递到肿瘤部位。脂质体表面结合一定抗肿瘤单克隆抗体或片段(第一代免疫脂质体)，口r 使脂质体有效聚集于肿痛|j：：“1。但这种免疫脂质体在体内的治疗效果丰目对较低口J，这是由于在脂质体到达 靶部位前，就被RES系统识别、吞噬。在第一代免疫脂质体的基础r，将如PEG等亲水性大分子同时接 在脂质体表呵(第二代免疫脂质体)，增长了脂质体在体内的衙环时间”I，{日由于PEG长链对单克降抗体 的，舁蔽作用，免疫脂质体的主动靶向能力极大下降。将PEG末端官能团的改变，使单克隆抗体可接在PEG 末端。制得的免疫脂质体为空问稳定免疫脂质体(Sterical[y 质体。体内实验证明，卒问稳定免疫脂质体具有较高的治疗效累”j。 基因工程技术的进步，使从中克隆抗体中寻找、分离主要识别区成为可能”J。重组识别区轻链(v。)、 重链(vL)构成的单链抗体(Single-chain 目的[7,81。现已有研究将睁链抗体用于脂质体的制备I”“，体外效果良好m1。 其机理进行初步探讨。 l材料与仪器 G一50、 泰伟药业(上海．中国)；胆I占J醇(牛化试剂)，购自北京化学试剂公刊(北』f，中田)；Sephadex 氮羟基琥玻酰哑胺磺酸钠： l—Ethyl．3-(3-dimethylaminopropyl)earbodiimide(EDC)、 Rcckford公司(IL)；Fluorescein N—hydroxysulfosuccinimide(S．NHS)，购FI 山清，购自机州四季青生物制品公司(中国)；鼠抗人抗His抗体，由第四军医大学生化教研室提供。其它 试剂均为分析纯。 流式细胞仪，购白BECKMAN—COuu卫R Inc．(美囤)；BIORAD550型酶联免疫测定仪．购自BIO．RAD Inc．(美国)：Aloka 公司(日牟)；RE一52A型旋转蒸发仪，购臼上海怔荣生化仪器厂；SHB型衍环水式多用真空采，购自郑州 长城科工贸有限公司：JY92．H型细胞超声波粉碎机，购自宁波新芝仪器公司；UV-9100型紫外分光光度计， 公司(日本)。 2方法与结果 2-ethanediyl)，Chol—PEG__c00H]的台成及结构裕定 298 下燥吡啶的混台溶剂一h氮气保护下，回流搅拌48h后，反应混合物过滤。滤液减压除去溶剂。剩余物溶 1 mL饱和碳酸氧钠，过滤后，使Hj 解于10 mL 钠T燥。过滤后，减压浓缩到2ml，加入20mL乙醚使产物析出，抽滤除去溶剂。合成产物加入10 丙酮溶解，重结晶。 干燥后，得Chol—PEG．COOH(224mmol／L，90％)。将原料和产物进行TLc分析，展开剂：