ELISA法与胶体金法相结合提高乙型肝炎表面抗原检测准确度的分析.docVIP

精品论文 参考文献 ELISA法与胶体金法相结合提高乙型肝炎表面抗原检测准确度的分析 张艳春（河南省驻马店市精神病医院 463000） 　　【摘要】目的 探讨ELISA法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）准确度。方法　ELISA法、胶体金法。结果　ELISA法影响因素较多，胶体金法复查阳性及可疑标本可减少甚至避免假阳性结果。结论　两种方法结合应用于临床可提高乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测的准确度。 　　【关键词】 乙型肝炎表面抗原 ELISA法 胶体金法 影响因素 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）43-0157-01 　　乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的肝脏损坏，乙型肝炎的实验室诊断对其治疗及预防有着重要参考意义[1]。HBsAg存在于患者的血液、唾液、乳汁等体液中，人体在感染HBV2-6个月后，可在血清中检测到HBsAg阳性结果。所以HBsAg的检测具有非常重要的意义。 ELISA法检测HBsAg因其准确、简便、成本低，便于大规模全自动仪器操作等特点，已被各实验室广泛应用，由于ELISA法影响因素较多尤其是临界值（cutoff）附近标本结果吸光度易波动而引起误判，影响结果的可靠性。 　　1.对象和方法 　　1.1研究对象 　　对我院2013年3月-2013年10月门诊或住院病人用ELISA法检测HBsAg且结果为阳性的标本用金标法复检。 　　1.2研究仪器 　　芬兰MK3酶标仪、上海科华ST-36WT洗板机、湖南TD5A-WS台式离心机、北京市永光明GH-360隔水电热培养箱。 　　1.3研究试剂 　　市售国产ELISA法试剂盒、胶体金试条，贴有中国药品生物制品鉴定所防伪标记批批鉴定合格，质控品由河南省临检中心提供，以上试剂均在有效期内。 　　1.4研究方法 　　（1）ELISA法：手工操作与半自动酶免分析仪相结合。手工加样，37℃恒温孵育，洗涤，最后在酶标仪上比色。(2) 胶体金法:按说明书要求操作，在质控区出现紫红色条带测试区未出现为阴性，质控区和测试区均出现紫红色条带为阳性，质控区未出现紫红色条带为无效，加样后10分钟内观察结果。 　　2.结果 　　对我院2013年3月—2013年10月门诊或住院病人用ELISA法检测HBsAg结果为阳性以及显色???浅酶标仪检测阴性或落在灰区内的可疑标本进行登记并逐个用胶体金法进行复检，如果两种方法检测都是阳性结果就写上编号和姓名报阳性结果，对于两者不一致的标本查找原因重新复检后再报结果。见表1： 　　表1 2013年3月—2013年10月我院检测HBsAg阳性结果 　　3.讨论 　　对于用ELISA法检出HBsAg阳性或弱阳性以及灰区内弱显色标本用胶体金法进行逐个复检，两者如果都是阳性就报阳性结果，如果一阴一阳再重新复检查找原因后报结果。我室总结出影响ELISA法检测HBsAg的诸多因素如下：（1）试剂盒的质量。应用高质量的试剂盒是ELISA法实验结果准确可靠的根本保证。（2）人为因素。人为加错样本、加错酶结合物也会导致假阳性结果。（3）洗板因素。洗板时被污染、洗板遍数不够、洗板时浸泡时间不足、加液量不够等都可导致洗板不彻底，出现假阳性结果。（4）有时ELISA法检测阳性结果再用胶体金法复检出阴性结果，继续查找原因时发现室温低时胶体金法会出现假阴性结果。通过长期的临床实践，我室在室温达不到要求时，就把胶体金法复检阳性结果的检验过程都放在37℃恒温下进行，从而避免胶体金法复检时出现假阴性结果。 　　4.结论 　　综合以上2种方法所做出的结果来看，ELISA法比胶体金法的特异性和灵敏度高，又加上ELISA法比较经济实惠且适合大批量检测，所以应用最广最多，但由于方法学限制、繁杂的手工操作使得重复性较差，而胶体金法最突出的优点是快速、及时，提高了检测的速度，其标记物稳定性较高，不需要贵重仪器，更适合于现场应用，实验结果可长期保存，但其特异性和灵敏度较ELISA法差，对弱阳性标本有一定的漏检率。对于我们实际工作者来说，把2种方法有机的结合起来使用，既提高了特异性和灵敏度，又达到了快速及时的要求，更有效预防盲目报出假阳性结果。 　　 参考文献 　　[1] 于莉.乙肝表面抗原检测方法的比较［J］.现代医药卫生2005,21（22）:3134-3135.