牛弹性蛋白酶（Elastase）酶联免疫分析（ELISA）.docVIP

牛弹性蛋白酶（Elastase）酶联免疫ELISA） 试剂盒使用说明书实验原理本试剂盒应用法测定中水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入，经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 8 标准品S1（36 U/L） 0.5ml×1瓶 2 链霉亲和素-HRP 6ml×1瓶 标准品S2（24U/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 标准品S3（12U/L） 0.5ml×1瓶 4 生物素标记的抗-IgG抗体 6ml×1瓶 标准品S4（6U/L ） 0.5ml×1瓶 5 显色剂A液 6ml×1瓶 标准品S5（3U/L） 0.5ml×1瓶 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 9 说明书 1份 7 终止液 6ml×1瓶 10 封板膜 2张 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 操作步骤 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中加入50微升样本，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干μl。μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 洗涤：操作同4。 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。450nm波长依序测量各孔的度（OD值）计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。 浓洗涤液会有析出，稀释时可在水浴中加温助溶乘以 保存条件及有效期 1．；2-8。 Bovine Elastase FOR RESEARCH USE ONLY Package size: 96 determinations. Drug Names Generic Name：Bovine Elastase ELISA Kit. Purpose This kit allows for the determination of Elastase concentrations in Bovine serum, blood plasma, and other biological fluids. Principle of the assayThe kit assay Bovine Elastase level in the sample，use Purified Bovine Elastase antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, Samples which including standards of known Elastase concentrations and unknowns are pipetted into coated microtiter wells, after Incubating ,add Biotinylated anti-IgG,and Combined Streptavidin-HRP, become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution, TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, And at the effect of acid the color finally become yellow, The intensity of this coloured product is directly proportional to the concentration of