G试验研究新进展及规范化操作 苑庆华PPT.ppt

感谢各位专家 天津市一瑞生物工程有限公司是在天津经济技术开发区注册的一家高新技术企业，作为总公司的生产基地和售后服务中心。主要致力于生物制品及临床诊断试剂的研制开发，1999年在国内首创体液内毒素动态、定量检测试剂盒,并获国家专利，2000年新研制开发出体液深部真菌定量检测试剂盒以及血液透析内毒素定量试剂盒。同时研制开发出内毒素及深部真菌检测专用真空采血管及其他配套产品。 G试验研究新进展及规范化操作 北京金山川科技发展有限公司 天津市一瑞生物工程有限公司 侵袭性真菌感染(IFI) 指致病性真菌侵犯皮 下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病，危害性较大。 条件致病性真菌 念珠菌属 曲霉属 隐球菌 其他 侵袭性真菌感染的诱因 1.内源性诱因 影响机体抵抗力的各种疾病，如白血病、癌症、结核、 肺脓肿、糖尿病、肝脏疾病以及维生素缺乏等 2.外源性诱因 广谱抗生素，抗肿瘤药物和免疫抑制剂； 插管等侵袭性治疗，骨髓和实体器官移植； 免疫缺陷综合症 国内侵袭性真菌感染不容忽视 感染率(%) 临床药物治疗杂志 2007年第5卷第1期 IFI诊断困难及漏诊情况严重 1. 尸检研究发现，75%的侵袭性真菌感染病例在生前漏诊. 诊断困难的主要原因： 临床表现不典型，易被基础疾病所掩盖 确诊常需侵入性手段获得组织标本，侵入性操作常因患者的病情所限难以实施 真菌检测项目开展相对不足或滞后 真菌感染诊断方法 一.确诊方法 组织学检查: 肝组织检查 真菌学检查:血液, 肝穿刺液培养 二.辅助诊断方法 眼底检查: 眼内炎症 影象检查:腹部CT , MRI等 血清学检查: (1-3)-β- D 葡聚糖(G试验 ),半乳甘露聚糖(GM试验)等 遗传学检查: 真菌DNA检查（PCR） The Japanese Journal Of Antibiotics 58-3 June 2005 (1-3)-β-D-葡聚糖结构 葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中 1,3-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌细胞壁上的特有成分 以1,3-β-糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链 以分支状1-6-β-D葡萄糖残基作为侧链 (1-3)-β-D-葡聚糖特性 对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G实验灵敏。 当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。 在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。 可用于检测念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、镰刀菌、卡氏肺孢子菌 不可检测隐球菌、接合菌（根霉/毛霉等） G 试 验 原 理 (1-3)-β-D 葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解物中的G因子，从而引起裂解物的凝固，故称G试验。 （1-3）?-D-Glucan G因子 活化G因子 凝固酶原 凝固酶 凝固蛋白原 凝固蛋白（凝胶） G试验的国内外一览1 日本－生化学 设备：Wellreader SK 603 配套试剂:Fungitec G test MK G试验的国内外一览2 日本－Wako 设备：トキシノメーター　MT-5500 配套试剂： ? -Glucan test Wako G试验的国内外发展进程１ 1995年日本生化学首先开发出检测（１－３）- ? －D Glucan 的Gluspecy reagent , 之后取得日本厚生省批准改为： Fungitec G Test 90年代末，日本生化学收购美国的ＡＣＣ公司，并以ＡＣＣ公司为主在美国于２００４年取得FDA认可的Fungitell Assay． 1996年，日本和光公司也开发出了检测１－３）- ? －D Glucan 的? -Glucan test Wako试剂盒，并取得日本厚生省批准．　 G试验的国内研发过程 研发人员： 90年代中期前往日本国立卫生试验所研修学习，在日本药局方细菌内毒素检查法起草人小川先生指导下，开展细菌内毒素及真菌检测方法研究，期间曾前往日本生化学东京研究所和日本wako大阪总部研修考察．在日本研修工作期间，学习到大量有关G试验方面的知识． 回国后，针对国内临床检测需求，开展细菌内毒素及真菌在血液中微量检测方面研究，并取得多项成果． 经过大量实验及临床对比研究，终于在2002年研制成功．经与国外同类试剂对比，相符率在100％． 另外，由于生产用原料来源不同，检测原理差异，其Cut off值存在一定差异． 在日本生化学东京研究所研修１ 在日本生化学东京研究所研修２ 在日本和光纯药大阪研究所研修１ 与日本东京药