哈氏弧菌文蛤分离株WG1702培养条件优化研究.pdfVIP

第 z9卷第 2期 水 产 科 学 Vol_29No．2 2010年 2月 FISHERIES SCIENCE Feb．2O10 哈氏弧菌文蛤分离株 WG1702培养条件优化研究 刘连生 ，闫茂仓 ，赵海泉 ，陈倩影 ，马爱敏 。，林志华 (1．浙江省海洋水产养殖研究所，浙江 温州 325005；2．安徽农业大学 生命科学院， 安徽 合肥 230036；3．山东农业大学 动物科技学院，山东 泰安 271018) 摘 要：于 2007年 9月在江苏 吕泗文蛤发病高峰期，从发病文蛤体 内和养殖水体中分离到 l株哈氏弧 菌 WG17O2，培养条件优化试验结果表明，菌株 WG1702在 32h时达到生长高峰，最适温度为 28-C，最 佳初始 pH为 7，最佳盐度为 4O，最佳装液量为 60ml／150ml，促进生长 的金属离子是 NH 、Fe 、 Fe3 ，最佳 C、N源为葡萄糖和蛋白胨；pH、温度、不同菌龄正交试验证明最佳组合为pH7．11，温度 28 ℃，菌龄 24h，通过方差分析结果可以看出三因素 中pH对生长影响显著 (PO．05)。 关键词 ：文蛤 ；哈氏弧菌；最佳生长条件 中图分类号 ：$917．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003一ll11(2O1O)02—0079-04 多年来在贝类疾病防治 中使用抗生素等药物 ， 5．0g，酵母膏 1．0g，盐度 25的陈海水 1000ml，四 导致了贝类组织药物残留、水体 中耐药菌传播等严 水磷酸铁 0．001g)，用无菌的 1mol／LHC1和 1 重问题 ，随着对水生动物环保药物监管工作 的加 mol／LNaOH准确调节培养基 pH7．6～7．8，经高 强 ，多种抗 菌类药物 已被禁用 。哈 氏弧菌 (Vibrio 压灭菌后接种 哈 氏弧菌 (菌液浓度为 OD 。 = harveyi)是鱼、虾、贝等水产经济动物的主要致病 0．253，加入 1．5ml菌液)，于 28℃恒温培养箱 中 菌之一 ，由于它们广泛存在于 自然海区和海水养殖 液体培养 2d，8h时开始取样 ，每 4h取样 1次，分 区域，常造成大量水产经济动物死亡，给养殖业者造 光光度计测定 OD ，以OD 为纵坐标 ，时间 成巨大的经济损失。哈氏弧菌感染海水养殖动物的 为横坐标绘制生长曲线(OD。。 值可以用血球计数 报道较多[1]，感染该菌能弓l起鱼体表充血、皮肤溃 板测出具体细菌数)。 疡、尾鳍烂蚀等症状，对鱼、虾 、贝造成很大的危害。 1．2．2 温度影响 笔者从患病的文蛤 (Meretrixmeretrix)中分离到 1株 温度组设 4、10、15、20、25、28、32、37、4O℃ 9 致病菌 WG1702，经鉴定为哈氏弧菌 ，并对哈 氏弧菌 个梯度 ，每个梯度 3个平行。5Oml培养液接种哈 WG1702菌株进行培养条件优化，对该菌培养的起始 氏弧菌液 0．2ml(菌液浓度为 OD5。 一0．274)，于 pH值、盐度 、pH、最佳装液量及培养时间、培养温度 28℃恒温培养箱中培养 2d，测定 OD。。值 。 等影响培养产量的因子进行了测试和 比较，旨在为 1．2．3 pH影响 今后建立高效的哈氏弧菌培养技术，为种菌的培养 pH值设计 ：pH 5～13，梯度为 1，共 9个梯度 ， 和生产工艺提供理论依据和技术支持。 每个梯度 3个平行 。50ml培养液接种哈氏弧菌液 0．2ml(菌液浓度为 OD 。 ：==0．377)。于 28℃恒 l 材料与方法