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South
·2432· 南方医科大学学报U Med
Univ) 2010;30(11)
BNIP3干扰质粒的构建及鉴定
学教研室,广东广州510515)
3(BNIP3)干扰质粒,研究其对BNIP3蛋白表达水平的影响。方
摘要:目的构建大鼠Bcl.2/EIB.19K-interactingprotein
法利用Invitrogen公司在线软件设计大鼠BNIP3(NM053420)干扰片段,合成互补的单链寡核苷酸,蒋退火后形成的
的干扰质粒与大鼠BNIP3表达质粒共转染到HEK293细胞中,采用实时荧光定量PCR和Western
blotting检测对目的
基因的干扰情况。结果构建的2个干扰质粒经测序证实序列iF确,与BNIP3表达质粒共转染后显著抑制外源性BNIP3
的mRNA和蛋白表达。结论成功构建厂大鼠BNIP3干扰质粒,为进一步研究BNIP3的功能打下了基础。
关键词:BNIP3;RNA干扰:HEK293
文献标志码:A 1-2432-04
中图分类号:Q789 文章编号:1673-4254(2010)l
ConstructionandidentificationofaRNAinterferenceforrat
BNIP3
plasmid gene
CHEN Xing-meil,LI Xiao—wenl,GAO
Min91,ZHANG Bo—xin91,SUNHong-yu2,LI Tian-ming‘
of of of
BasicMedicalSciences,SouthemMedical
1DepartmentNeurobiology,2DepartmentPhysiology,College
510515,China
ToconstructaI矾A ratBcl-2厄1B—l and
Abstract:Objecfive interferingplasmidtargeting 9K—interactingprotein3(BNIP3y
assessitseffecton BNIP3 inHEK293cells.MethodsThemiRNA were
exogenousexpression sequencesdesignedUSing
BLOCK.iTRNAi and intodouble—strand whichwereclonedintothe
Invitrogen Designersynthesized oligonucleotides.
lransformationofthe intO Ecoli
pcDNATM6.2,GW/EmGFP.miRvector,followedby productcompetentTopl0 cells.Atier
the and
of trailsformedbacteria,thewasextracted beforeitsCO.transfectionwith
expansion
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