ADAM10基因RNA干扰重组慢病毒的转导对H9C2细胞N型钙粘蛋白的解整合素金属蛋白酶10加工途径的影响.pdfVIP

·221· 国匿鱼瘗堂苤查!!!!生!旦筮堑鲞筮!塑!坐』!些些坠!!!：丛竖：!Q!!：!!!：堑：盟!：! ·论著· ADAMl0基因RNA干扰重组慢病毒的转导对 H9C2细胞N型钙粘蛋白的解整合素金属 蛋白酶10加工途径的影响 李小鸥黄巍周丽荣 【摘要】 目的构建ADAMl0基因RNA干扰重组慢病毒，观察其在N型钙粘蛋白底物加工过程中 的重要性，为探求该加工途径在维持心肌组织结构形态和完整性中的作用打下基础。方法筛选确定 ADAMIO基因RNA干扰有效靶序列，合成靶序列的OligoDNA，与LentiLox3．7载体连接，PCR筛选阳性 blotting检测心肌细胞N型钙粘蛋 克隆，测序鉴定。用重组慢病毒转导心肌细胞(H9C2)，通过Western 白及其C一端的CTFl片段的蛋白表达，流式细胞学实验检测N型钙粘蛋白在心肌细胞表面的表达，利用 黏附实验检测转染前后心肌细胞黏附能力的变化。结果 成功构建ADAMt0shRNA慢病毒载体，包装 慢病毒，转导心肌细胞。与阴性对照组相比，转染组心肌细胞N型钙粘蛋白表达提高，CTFl片段表达减 少；细胞表面N型钙粘蛋白的表达增多；心肌细胞黏附能力提高。结论初步证明心肌细胞中ADAMIO 在N型钙粘蛋白的加工水解过程中发挥重要作用，为进一步明确该水解途径在维持心肌细胞形态结构 和完整性方面所起的作用打下了实验基础。 【关键词】 RNA干扰；ADAMl0；N型钙粘蛋白；细胞黏附；慢病毒 roleonthe oflentiviralvectorofRNAinterferenceofADAMIOanditsinhibitive Construction gene N-cadherinincardiac LI ADAMs of Xiao—OU+，HUANGWei，ZHOU cleavage myocyte Li-rong．+Depa— retment 430030，China ofPediatrics，Renminghospital，WuhanUniversity，Wuhan author：LIXiao-OU，E-mail：lxou27@163．corn Corresponding ToconstructalentiviralvectorofRNAinterferenceof andob— 【Abstract】0bjective ADAMl0-gene oftheADAMl0in neuronal Theeffective servetherole shedding cadhefin(N．cadhefin)．Methodssequence wasconfirmed．BothsenseandantisenseDNAofthe ofsiRNA ADAMIO targeting gene Oligo targetingsequence was andcolonedintotheLentiLox3．7 wasconfirmedPCRand designed，synthesized vector，and by sequen— into ofN