CYP2E1基因RNA干扰载体的构建与表达.pdfVIP

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2018-04-07 发布于北京
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CYP2E1基因RNA干扰载体的构建与表达.pdf

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--● 第24卷第4期卜j 血表明，CYP2E1介导了多种化合物致肝损伤，如三氯乙助质粒pCMV—dR8．91，均由中山大学医学院惠赠。 1．2主要试剂烯、乙醇、氯仿等口‘31。CYP2E1介导化合物代谢产生细胞损伤的方式有两种：CYP2E1代谢分解底物产生的中间代谢物与核酸和蛋白质等大分子物质结合，引起细 taqMix 胞损伤；对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸 Mini (Fermentas公司)，RNeasy dinucleotide DNA adenine I、T4 性内切酶彳即I、EcoR (nicotinamide phosphate，NADPH) 具有较高的氧化活性，不依赖配体产生自由基，导致 marker和DH5 DNA损伤、基因突变。外源化合物对CYP2E1基因表达 Ot大肠杆菌感受态(天根生物公司)，调控机制复杂，有学者发现三氯乙烯对CYP2E1、 CYPlAl、CYP3A43基因有明显诱导作用，促进对三氯乙RT Kit、SYBR RT—PCR reagent Primescript PrimeScrip 烯的代谢㈣。另外，研究发现，CYP2E1和CYPlAl基因 Kit(TaKaRa公司)。多态性与三氯乙烯引起药疹样皮炎存在一定关系吲。 1．3设计合成shRNA interference，RNAi)是大部分生物 RNA干扰(RNA 体存在的一种普遍现象，在转录水平调控基因表达。 RNAstructure 近年来RNAi已经发展成为一种新型的基因阻断技术，广泛应用于特异抑制基因的表达及其功能研究。评估，最后得到3条19nt靶序列，再设计1对对照序列慢病毒载体可携带外源双链shRNA进入细胞，整合到细胞的基因组中，高效、稳定、特异的抑制目的基因 I酶切位点 shRNA的DNA模板单链。设计如下：Age 表达。为了深入研究三氯乙烯代谢，本文构建 +19 CYP2E1基因shRNA慢病毒表达载体并形成CYP2E1基互补序列+RNA 因沉默细胞，为进一步研究三氯乙烯毒性机制提供科 I酶切位点6个区域，3条干扰序列和1条对 TF