KDR 启动子增强子靶向干扰磷脂酰肌醇3激酶信号通路对大鼠血管内皮细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

·1440· ·胸一心夕卜科· KDR启动子／增强子靶向干扰磷脂酰 肌醇3激酶信号通路对大鼠血管内皮 细胞增殖和凋亡的影响 王倩邓勇志徐俊文 陈丽 杨雪峰 【摘要】 目的针对大鼠血管内皮细胞(VEC)的磷脂酰肌醇3激酶B亚单位(Pik3cb)，构建 KDR特异性启动子／增强子真核表达载体，观察其对VEC增殖和凋亡的影响。方法构建KDR特 异性启动子／增强子真核表达载体并转染大鼠VEC。实验分5组，A组：正常VEC；B组：转染特异性 KDR质粒，浓度2．0mg／L；C组：转染非特异性巨细胞病毒(CMV)质粒，浓度2．0mg／L；D组：转染空 质粒，浓度2．0 h后，实时 mg／L；E组：阳性对照渥曼青霉素，浓度50nmol／Lj、分别于转染24、48、72 mRNA相对表达量，细胞计数试 荧光定量逆转录一聚合酶链反应(RT—qPCR)法检测各组细胞Pik3cb 剂盒(CCK一8)和流式细胞仪检测各组细胞增殖抑制率和凋亡率。结果转染24、48、7211后，RT— qPCR法测得KDR组Pik3cbmRNA相对表达量分别为(54．82±2．77)％、(50．54±3．98)％和 (35．47-4-4．83)％，均明显低于lE常对照组(P0．05)；CCK一8法测得KDR组细胞增殖抑制率分别 为(21．98±2．25)％、(24．32±3．04)％和(26．38．4-5．06)％；流式细胞仪测得KDR组细胞凋亡率分 别为(9．9±1．3)％、(31．o±7．4)％和(44．5±8．3)％，细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于正常对 照组(Po．05)。结论KDR特异性启动子／增强子真核表达载体可通过下涮磷脂酰肌醇3激酶 (P13K)信号通路特异性抑制VEC增殖并促使其凋亡? 【关键词】RNA干扰；血管内皮细胞；磷脂酰肌醇3激酶 RNA interferenceof 3-kinase kinaseinsertdomain-con- phosphatidylinositol signalingpathwayby influencesthe and of taining ratvascularendo— receptorpromoter／enhancer proliferation apoptosis thelialcells WA{、G Jun—wen．CHEN Y0ng一出t。XU Li。YANG of Qian，DENG Xue—feng．Department CardiothoracicSecond Medical 030001．吼ina Surgery，theTeachingHospitaZ，ShanxiUniversity，死iyuan author：DENG Corresponding Yong-zhi．Emaif：dengyongzhi@hotmail．COnt Toconstructthe insert 【Abstract】Objective kinase domain—containingreceptor(KDR)specific vectorforRNAinterferenceof promoter／enhancereukaryonexpression