细胞凋亡 流式细胞技术.ppt

浅谈流式细胞仪技术Flow Cytometer 目录 流式细胞仪的历史 History of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM  (一) 流动室与液流驱动系统 流动室 (flow chamber或flow cell) 是仪器核心部件，被测样品在此与激光相交。流动室由石英玻璃钢制成，并在石英玻璃中央开一个孔径为430 μm×180μm的长方形孔，供细胞单个流过，检测区在该孔的中心，这种流动室的光学特性良好，流速较慢，因而细胞受照时间长，可收集的细胞信号光通量大，配上广角收集透镜，可获得很高的检测灵敏度和测量精度。流动室内充满了鞘液，鞘液的作用是将样品流环包，鞘液流是一种稳定流动，操作人员无法随意改变其流动的速度，样品流在鞘液的环包下形成流体力学聚焦，使样品流不会脱离液流的轴线方向，并且保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而得到准确的细胞荧光信息。 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪的结构及工作原理 Components and Principle of FCM 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis  流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis 机制  Application of FCM on apoptosis 磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis TUNEL法 检测原理： TUNEL法 Tunel 原位凋亡检测试剂盒 检测方法 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis Diagram 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 Application of FCM on apoptosis 图4-2-13 细胞坏死碎片峰的DNA直方图 在DNA二倍体G0/1峰前呈反抛物线形，自左向右呈从高至低分布，即为细胞碎片峰。另有1个DNA二倍体G0/1细胞峰(红色)和2个DNA异倍体G0/1细胞峰(黄色和绿色)。 图4-2-14 凋亡细胞峰的DNA直方图 在DNA二倍体细胞G0/1峰前出现一个呈对称分布的亚二倍体DNA含量细胞峰，即为凋亡细胞峰;另有1个DNA二倍体G0/1细胞峰(红色)和1个异倍体细胞G0/1细胞峰 (黄色)。 图4-2-15 细胞碎片和凋亡同时存在的DNA直方图 在细胞DNA直方图上，在DNA二倍体细胞G0/1峰前，即有呈反抛物线形分布的细胞碎片峰，也有呈对称分布的细胞凋亡峰;还有1个DNA二倍体G0/1期细胞峰(红色) 和1个DNA异倍体G0/1期细胞峰(黄色)。 * 流式细胞仪的历史 1 流式细胞仪的结构及工作原理 2 流式细胞仪在细胞凋亡上的应用 3 例证 4 1934年,Moldaven是世界上最早设想使细胞检测自动化的人；1936年,Caspersson等引入显微光度术；1940年,Coons提出用结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白；1947年,Guclcer运用层流和湍流原理研制烟雾微粒计数器；1949年,Coulter提出在悬液中计数粒子的方法并获得专利。 流式细胞分析(f