免疫微生物实验课件（汕头大学）第8次 病毒学实验.pptVIP

* * * * * * * 医学微生物学实验 第8次 病毒学实验 1.病毒培养（录像） 2.观察正常细胞与病变细胞的镜下特征（示教) 3.病毒包涵体的镜下特征（示教） 4.血凝试验（操作），血凝抑制试验（结果示教） 病毒的基本形态 病毒感染的致病机制 1 病毒感染对宿主细胞的直接作用 杀细胞效应。Cytopathic effect, CPE 致细胞病变效应 稳定状态感染。多核巨细胞，包涵体 细胞凋亡 基因整合与细胞转化 2 病毒感染的免疫病理作用 抗体介导的免疫病理作用 Ⅱ、Ⅲ型超敏反应 细胞介导的免疫病理作用 Ⅳ型超敏反应 免疫抑制作用 某些病毒感染可抑制免疫功能 Phenomena of viral proliferation * changes of cell CPE（细胞病变效应） (Cytopathic effect) normal CPE (2)polykaryocyte(giant, multinucleate) （多核巨细胞） (3)inclusion bodies（包涵体） Measles giant cell HCMV Negri Body in neuron cell 病毒包涵体的镜下特征（示教） 呼吸道合胞病毒的包涵体 观察正常细胞与病变细胞的镜下特征（示教) 正常人胚肾细胞与病变细胞（接种腺病毒） 血凝试验血凝抑制试验 血凝试验 1 2 4 3 5 6 7 8 PB2 PB1 RNP RNA M2 M1 NA HA 分节段的（-） SSRNA PA RNA多聚酶 核糖核蛋白（RNP） 血凝素(HA) 神经氨酸酶（NA） 血凝及血凝抑制现象示意图 Influenza virus Influenza virus Anti-HA antibody Hemagglutination Inhibition 原理： 病毒表面有血凝素，能与鸡、豚鼠、人的红细胞 表面的受体结合而发生凝集现象。 HA ＋RBC(受体） 凝集（+) 室温 45min 血凝试验 应用：检测病毒的存在，滴定病毒的血凝效价，大致估计病毒颗粒的数量 (1个血凝单位＝106病毒颗粒) 加NS 加1:5病毒 加1％RBC 0.2ml 对倍稀释 0.2ml 0.2ml 步骤 RBC control 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 弃去 1 2 3 4 5 6 7 8 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:20 1:10 结果示意图 - + ++ +++ ++++ ++++ 效价？ ++++凝集显著，致密，成团块状，边缘不整； +++较疏松；分布面积较大，边缘不整； ++凝集清楚可见，红细胞于窝底形成环状，四周有小凝集块； +红细胞于窝底形成小团，边缘不光滑，四周有小凝集块； －红细胞于窝底形成圆点状，边缘光滑整齐，四周液体清晰； 以50％血球凝集（++）的最高病毒稀释度为试验的血凝滴度，即为1个血凝单位。 血 凝 现 象 血凝抑制试验 原理： 若血清中出现特异性抗体与相应病毒结合，可以 使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象 的出现，此为血凝抑制。 意义： 辅助诊断一些病毒感染。 恢复期比急性期血清抗体效价 ≥ 4 倍有诊断意义 ? 检测血凝抑制抗体 (已知病毒 +早,晚期血清) 血凝抑制现象示意图 Influenza virus Influenza virus Anti-HA antibody Hemagglutination Inhibition 若血清中出现特异性抗体与相应病毒结合，可以 使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象 的出现，此为血凝抑制。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 N.S. 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.4 1:5病人血清 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 - - 稀释度 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 血清对照 病毒对照 红细胞对照 4个血凝单位病毒 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 - 0.2 - 室温静置10min 1％红细胞 0.2 0.2