免疫微生物实验课件（汕头大学）医学微生物学实验4病原性球菌.pptVIP

医学微生物学实验4病原性球菌 病原性球菌分离、鉴定程序 实验内容 病原性球菌的形态染色与培养（脓汁标本，革兰染色，操作） 致病性葡萄球菌的分离和鉴定 甘露醇发酵（示教） 血浆凝固酶试管法（示教） 抗“O”试验（结果示教） 粪便标本接种于SS培养基（每人一个，下次实验用） 致病性肠道杆菌分离、鉴定实验设计 1 病原性球菌的形态染色与培养（G染色；观察示教，并绘图） 示教片： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌 （形状、大小、排列、染色 ） 菌落观察： 金葡、白葡、乙型溶血性链球菌 （形态、大小、表面、边缘、透明度、色素、溶血性） 2 致病性葡萄球菌的分离和鉴定（示教、操作） 甘露醇发酵（示教） 0.5%琼脂粉＋牛肉汤＋甘露醇＋指示剂（溴甲酚紫） 血浆凝固酶试管法（示教） 种类？检测哪种凝固酶？ 标记后，左侧滴加稀释兔血浆1滴；右侧滴加生理盐水1滴 无菌操作，取菌苔少许，混匀，观察有无凝集 3 抗“O”试验 原理 ASO，anti-streptolysin O 方法 作业 致病性肠道杆菌分离、鉴定实验设计 实验报告8 * 标本采集 直接染色镜检 血清学诊断 G+:葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌 G-:脑膜炎、淋病耐瑟菌 培养特性（溶血环，色素等） 形态染色镜检 生化试验（血浆凝固酶、甘露醇发酵） 药敏试验 分离培养 病原性球菌 Pathogenic cocci 脑膜炎奈瑟菌N. meningitidis 淋病奈瑟菌N. gonorrhoeae 葡萄球菌属 链球菌属 奈瑟菌属 Staphylococcus Streptococcus Neisseria 金黄色葡萄球菌S. aureas 链球菌 肺炎链球菌S. pneumoniae 疫苗 体液免疫为主 流脑 内毒素 弱 高 巧克力培养基 G- 肾形成双 脑膜炎奈瑟菌 性传播疾病 可自愈，免疫不持久 淋病 弱 高 G- 咖啡豆成双 淋病奈瑟菌 直接涂片 分离培养 血清学（ASO） 直接涂片 分离培养 药敏 微生物学检查 大叶性肺炎 化脓性感染 猩红热 风湿热、 急性肾小球肾炎 侵袭型疾病 食物中毒 假膜性肠炎 烫伤样皮肤综合征 毒性休克综合征 所致疾病 牢固 同型特异性免疫力 不强 免疫性 荚膜多糖疫苗 荚膜 弱 胆汁溶菌＋ 较高 草绿色溶血 自溶酶 G+ 矛头状成双 荚膜 肺链 青霉素G 细胞壁成分 外毒素 （红疹毒素 链球菌溶血素） 侵袭性酶 弱 菊糖- 胆汁溶菌- 较高 溶血 G+ 荚膜 乙链 防止医源性感染等 Coagulase staphylolysin PV Enterotoxin Exfoliatin TSST-1 超抗原 强 耐药株 SPA 4指标 低 色素 溶血 G+ 金葡 致病物质 抵抗力 抗原结构 生化反应 培养 形态染色 防治 致病性 生物学性状 病原性球菌 光镜下观察： 形状、大小、排列、染色 观察菌落： 形态 大小 表面 边缘 透明度 色素 溶血性 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 金葡 － － － － 白色或柠檬色 非致病性葡萄球菌 ＋ ＋ ＋ ＋ 金黄色 致病性葡萄球菌 耐热核酸酶 血浆凝固酶 甘露醇发酵 溶血素 色素 鉴定致病性葡萄球菌与非致病性葡萄球菌的4大指标 S.a c 血浆凝固酶玻片法（操作，提供菌种） 结果观察： 出现颗粒状凝集：＋ 不凝集：－ streptolysin O, SLO streptolysin S, SLS ASO检测意义： 活动性风湿热以及溶血性链球菌新近感染的辅助诊断。 摇匀，37?C 水浴 45min 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 1％红细胞悬液(ml) 摇匀，37?C 水浴 45min - 0.25 0.25 0.25 0.25 还原溶血素“O”(ml) - - 1:800 1:400 1:200 稀释倍数 - - 0.5 0.5 0.5 1：200血清(ml) 0.75 0.5 0.5 0.5 - 生理盐水(ml) 5 4 3 2 1 试管号 0.5弃去 结果观察 完全不溶血的血清最高稀释度即为抗“O”抗体的效价。 正常参考值为 400单位以下。 1区(1/10) 4区 3区 2区(1/5) 烧接种环 烧接种环 烧接种环 分区划线法 ★ 操作，将粪便标本接种于SS培养基 *