枯草芽孢杆菌apr基因的克隆和表达.pdfVIP

、 第 4 卷 第 5期 东 北 农 业 大 学 学 报 41f5、：77-81 2010年 5月 JournalofNortheastAgriculturalUniversity May2010 枯草芽孢杆菌apr基因的克隆和表达 张东杰L，马中苏 (1．吉林大学生物与农业工程学院，长春 130022；2．黑龙江八一农垦大学食品学院，黑龙江 大庆 163319) 摘 要：通过PCR技术克隆枯草芽孢杆茵蛋白酶apr基因，并分别对该基因和编码蛋 白进行同源性比较和酶 学性质分析。结果表明，apr基 因序列全长 1509bp，编码 503个氨基酸 ，同源性 100％；克隆到表达质粒pET一 22b(+)后 ，将重组质粒经热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，IPTG诱导表达，蛋白分子质量为 55ku。测定酶活 为 19500Um·E-l。该基因克隆和表达的成功对于制备大豆抗氧化肽具有实际应用价值 ，对进一步深入研究其生物 学和酶学机制具有重要意义。 关键词：枯草芽孢杆菌；apr基因；表达栽体；抗氧化肽 中图分类号：Q78 文献标志码：A 文章编号：1005—9369(2010)05—0077—05 CloneandexpressionofBacillussubtilisaprgene／ZHANGDongjie’lzMAZhongsu’ (1．CollegeofBiologicalandAgriculturalEngineeing，JilinUniversity，Changchun 130022，China；2． CollegeofFoodSciences，HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity，DaqingHeilongJiang163319， China) Abstract：BacillussubtilisproteaseaprgenewasclonedbyPCR technology，thehomologyofthis gene and code proteinwere compared，whichenzymologycharacteristicwasanalyzed．Itshowedthat full-lengthofgenesequencewas1509bp，503aminoacidbeingcoded，andtheconsistencyofsequenc— ingresultswas100％．RecombinantexpressionplasmidpET一22b(+)-aprwasconstructedandexpressedinE coliBL21successfully，proteinmolecularweightwas55ku，andthedeterminedenzymeactivitywas19500 U m‘L～．Thecloningandanalysisofthisgenecouldprovidevaluablegenematerialforsmallpeptidepreparing ofsoybeanprotein，whichhadgreatsignificanceondeepstudyingofthemolecularbiologicalmechanism． Keyw ords：BacillussubOlis；aprgene；expressionvector；anti—oxidationpeptide 大豆抗氧化肽是蛋 白水解产物 中具有清除烃 工业生产酶市值 10亿美元，蛋 白酶占工业生产酶 基 自由基Ⅲ、终止单线态氧的生成嘲、鳌合重金属 的三分之一，75％为水解酶类，市值约占60％；而 离子捕捉体 内自由基3【1等抗氧化功效的部分 ，具有 工业蛋 白酶的50％都是微生物法生产的6『1，上个世 抗氧化、延缓机体衰老 、调节机体免疫等生理功