实验九 氨基移换反应及其产物的鉴定-20081215.pptVIP

实验十四;一、实验目的和要求 1、学习鉴定氨基移换反应的简便方法及其原理； 2、学习纸层析的原理和操作技术。;二、实验基本原理 1.氨基移换反应： 在氨基移换酶（转氨酶)的催化下，氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的互换反应。 转氨酶的种类很多，任何一种氨基酸进行转氨作用时都由其专一的转氨酶催化。转氨酶的最适pH接近7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性最强。 转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase, GPT）、谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT）活性较高。 ;GPT催化下的转氨基反应为：;; 溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示： ;三、实验材料与试剂 1、实验材料 动物肝脏(牛蛙肝或猪肝） 2、实验试剂 ⑴ 0.01mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）（转氨反应所需缓冲溶液） ⑵ 0.1mol/L α－丙氨酸 （pH7.4）（转氨反应底物，同时作为纸层析点样时的标准样品） ⑶ 0.1mol/L α－酮戊二酸 （pH7.4） （转氨反应底物） ⑷ 0.1mol/L 谷氨酸（pH7.4）（纸层析点样时的标准样品） ⑸ 展层溶剂－酚溶液（纸层析用） ⑹ 10％