植物组织培养之培养基配制.pptVIP

植物组织培养 组织培养（tissue culture） 细胞全能性（totipotency）：植物体的每个细胞携带着一套完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。 组织培养（tissue culture）：在无菌条件下，分离并在培养基中培养离体植物组织（器官或细胞）的技术。 ②促进芽的分化：CTK/IAA高时，形成芽；低时形成根。 + auxin + cytokinin Auxin Cytokinin Fig. 28-9 组培的应用 快速繁殖 脱除病毒 培育新品种 胚培养 单倍体培养 试管受精 体细胞无性系的变异和筛选 原生质体培养和细胞杂交 基因工程育种 植物种质资源的保存和交换 次生代谢物质的生产 A B C D 烟草的生长过程 （A、B、C、D为不同生长时期） callus induction callus co-culture the first selection rootage redifferentiation the second selection 水 稻 转 化 烟草的组织培养 培养基的配制 接种前准备 材料处理接种 MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L 每瓶50ml培养基 琼脂粉用电子天平称量 解剖刀、剪刀、鼻形镊 9寸培养皿（内附滤纸） 500ml 无菌水两瓶 废液缸、打火机、酒精灯 酒精棉球、70%乙醇、 0.1% 升汞 采回的烟草叶片流水冲洗干净，草纸擦干，备用。无菌操作台上，裁剪成0.5×0.5cm叶片，放于70%乙醇中处理30秒，无菌水洗净，再放到0.1% 升汞溶液中5分钟，无菌水冲洗干净，吸干防于培养基上。 MS培养基配方（mg/L ） 大量元素 NH4NO3 1650 KNO3 1900 KH2PO4 170 MgSO4·7H2O 370 CaCl2·2H2O 440 微量元素 MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 H3BO3 6.2 KI 0.83 NaMoO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 Fe盐 FeSO4·7H2O 27.8 Na-EDTA 37.3 有机物质 盐酸硫胺素VB1 0.4 烟酸 VB5 0.5 盐酸吡哆醇VB6 0.5 肌醇 100 蔗糖 30g 琼脂 8g/L pH 5.8 培养基配制注意的问题 微量元素应该精确到0.0001克，大量元素可精确到0.01克。大量元素母液倍数略低，一般为10～20倍，微量元素和有机成分一般为50～100倍。 母液配制组合 Fe盐的配制方法 激素的配制和保存 配制流程 水（100ml） 大量元素 微量元素 有机物质 Fe盐 蔗糖激素 定容 调节pH到5.8 分装于盛有琼脂粉的锥形瓶中 高压灭菌 常用仪器设备 培养条件 实验要求 配制六瓶两种激素浓度的培养基 两瓶无菌水 培养皿（中间包有滤纸6张）4个 烧杯4个 检查各自的鼻形镊、解剖刀 外植体的选择 选择部位 取材季节的选择 器官发育年龄的选择 取材大小的影响 诱导的成功率： ——脱分化和再分化的难易程度不同选取外植体 外植体消毒灭菌的要求 消毒剂 使用浓度(%) 去除难易 消毒时间(分钟) 效果评价 酒精 70-75 易 0.2-2 好 次氯酸钙 9-10 易 5-30 很好 次氯酸钠 0.5-5 易 5-20 很好 氯化汞 0.1-0.3 较难 2-10 最好 过氧化氢 10-12 最易 5-15 好 新洁尔灭 0.5-5 易 20-30 好 抗生素类 4-5(mg/L) 较难 5-30 较好 注：表面活性剂吐温的加入可以提高消毒剂的渗透力和杀菌效果。 * FIGURE 21.13 The regulation of growth and organ formation in cultured tobacco callus at different concentrations of auxin and kinetin. At low auxin and high kinetin concentrations (lower left) buds developed. At high auxin and low kinetin concentrations (upper right) roots developed. At intermediate or high concentrations of both hormones (middle and lower right) undifferentiated callus developed. (Courtesy of Donal