Col生态型拟南芥AP3基因启动子克隆及植物表达载体构建.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2011年，第 30卷，第 1期，第2卜26页 GenomicsandAppliedBiology，2011，Vo1．30，No．1，21—26 研究报告 A Letter Col生态型拟南芥AP3基因启动子克隆及植物表达载体构建 范丙友 高水平 侯小改 胥华伟 史国安 孔祥生 1河南科技大学农学院，洛阳，471003；2河南科技大学林学院，洛阳，471003 通讯作者，fanbingyou2005@163．corn 摘 要 隶属于MADS—Box基因家族的拟南芥花器官B类特征基因APETALA3 丹)在花瓣和雄蕊中特 异性地表达：AP3基因编码转录因子，与A类和 C类特征基因协同作用控制双子叶植物花瓣和雄蕊的发育。 研究表明A丹 基因启动子为花特异表达启动子。因此，A丹 基因启动子的克隆及功能鉴定对于园林植物与 花相关的商业性状的定向改良具有重要作用。本文根据GenBank数据库报道的Ler生态型拟南芥A(ratioido． psisthaliana)AP3基因启动子序YJl(u30729)设计了一对特异性扩增引物，基于PCR技术，用高保真的KOD— plusDNA聚合酶扩增了长度为 1767bp的Col生态型拟南芥4丹 基因启动子，并命名为pAtAP3，其Gen— Bank登录号为FJ619533。B12seq在线分析表明pAtAP3与U30729序列的相似性达98％，与Col生态型拟南 芥BAC克隆T12E18(AL132971)9264~11030之间的碱基序列相似性达 100％，且该段序列的下游基因编 码 AP3蛋 白(CAB81799)，说明克隆序列为Col生态型拟南芥AP3基因的启动子。PLACE在线分析表明 丹 具有基本 的启动子元件 TATA．box和 CAAT—box，还包含大量与花特异表达相关的顺式元件 CArG1、CArG2、CArG3和anther—box等。本试验进一步构建了植物表达载体pAtAP3：：GUS，为该启动子的功 能鉴定奠定了基础 。 关键词 拟南芥，Col生态型，APETALA3启动子，植物表达载体构建 MolecularCloningofPromoterofAP3GenefromArabidopsisthaliana(E· cotypeCo1)andConstructionofPlantExpressionVector FanBingyou GaoShuiping HouXiaogai XuHuawei ShiGuo’an KongXiangsheng 1CollegeofAgriculture，HenanUniversityofScienceandTechnology，Luoyang，471003；2CollegeofForestry，HenanUniversityofScienceand Techn oloyg ，Luoyang，471003 Correspondingauthor，fanbinygou2005@163．com DOI：10．3969|晷ab．030．000021 Abstract BelongingtoMADS—Boxgenefamily，ArabidopsisfloralorganidentityBgeneAPETALA3 丹)is expressedinpetalsandstamensspecifically．AP3genewhichencodesatranscriptionfactorcontrolsthedevelop— mentofpetalsandstamensofdicotyledons，incombinationwiththeclassA andCgenes，respectively．Itindicated thatthepromoterofAP3genewasaflower-specificexpressionpromoter．Therefore，cloningandcharacterization ofAP3genepromoterfrom Arabidopsisthalianawillhavesignificanteffectsontheorientedimprovementofthe commercialtraitsrelatedtotheflowersofornamentalplants．Here，apairofspecificPCRprimerswasdesinged accordingtopromotersequenceofAP3geneofArabidopsisthaliana(ecotyp