犬接种狂犬病疫苗后细胞免疫因子的检测研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 同病例的检出率为ll，11，显示出雕PcR在CDV临床诊断中的优势。同时，研究发现I，J cDv广泛存在于病犬的眼、鼻、口腔分泌物及尿液t粪便中，这为采用R盯．PcR对犬瘟热 进行大规模检疫、分子流行病学调查时病料的采集提供了极大方便。此外，该方法在进行犬 瘟热的致病机理及病毒在机体的分布等定量研究时亦将得到广泛应用。 33据国内外学者报道，ⅦRO细胞是分离培养cDv的首选细胞【l““J，但常需传3．5 代后才产生细胞病变，所以在病毒分离早期无法判定是否分离成功Il”。本研究中对采集的 1l份临床疑似病例样本在vERo细胞进行了分离培养，盲传至第二代未出现细胞病变，常 法的敏感性．为判定cDV是否在VERO细胞分离成功提供了有效的检测手段。 3．4弱毒疫苗中病毒的含量对于疫苗的质量至关重要，生产中常用噬斑计数法和TcID50 法检测弱毒疫苗的病毒滴度，但二者均存在所需时间长，操作复杂及误差大等缺点。本研究 中采用sYBRGr∞nIRRT_PcR对四种犬弱毒活疫苗中的cDv进行了定量，结果发现每头 份疫苗中CDV含量均处于同一数量级水平，说明该方法可用于弱毒疫苗生产中病毒的定量。 该方法大大缩短了病毒滴度检测时间，且操作简便、结果稳定可靠，这将有助于弱毒疫苗生 产过程中的质量监控。 参考文献略 犬接种狂犬病疫苗后细胞免疫因子的检测 孙采云，薛霞，李扎航，鞠龚讷 (上海市畜牧善匡站，上海，201103) 擅要干2005年对狂犬病活疲苗免疫的犬只进行了知胞免疫性能的评估，采用ELlSA检测免疫天和非 免疫对照天的血清中白细胞介素2和T干扰素的难度．蛄果免疫犬血清样品的IL．2和IFN吖浓度分别于免 疫后7d上升．至免疲后3∞达到峰值。’¨后避步下降．但王120d仍保持较高浓度．未免疫狂犬藕疫苗的 对照蛆天，血清中I∽和IFN吖艰度无明显变化． 关键词太；EusA．白细胞介素2；T干扰素：血清浓度；检测 血清，基因l型病毒，可感染所有的温血动物，病毒在野生动物(狼、豺、狐狸、鼬鼠、蝙 蝠等)及家养动物(狗、猫、牛等)与人之间构成狂犬病的传播链，人主要被染疫动物或带 毒动物咬伤后感染。一旦受染，如不及时采取有效防治措施，可导致严重的中枢神经系统急 性传染病，病死率高达100％，对社会秩序稳定和人民的身心健康都构成了严重威胁。对犬 类注射狂犬病疫苗是防控人畜狂犬病的最有效措施，目前监测狂犬病免疫效果主要是检测免 疫抗体水平的高低，但细胞免疫应答在动物抗狂犬病免疫保护上也起着决定性作用【IJ。鉴于 此，我们于2005年3～9月采用评价细胞免疫效能的主要因子(白细胞介素2和Y干扰素)， 对狂犬病疫苗免疫后的犬只进行了检测和研究。 l材料与方法 1．1材科 1．1．1被检血清 来源于奉贤区青村养犬场．品种为比格医学实验用犬． 1．1．2试验用疫苗 来源于法国梅里亚动物保健有限公司，批号L177105。 ELISA试剂盒 1．1．3犬hterIeⅡkiⅡ2(n以)EuSA和如terfemⅡ一gamma(IFN吖) 进口分装，桌源于上海轩吴科技发展有限公司。 1053 经济动物传染病 1．2仔犬免疫狂犬病疫苗后的血样采集和Ⅱj2和IlN吖浓度检测 分别从青村养犬场随机抽取24头日龄接近的来自于免疫母犬的子代仔犬，于90d皮下 注射免疫狂犬病活疫苗，免疫剂量均为1头份．于免疫前和免疫后7d、15d、30d、60d、90d、 120d分别跟踪采血，并同步检测血清中IL-2和IFN吖的浓度。另选取相同日龄的20头仔犬 作非免疫对照，于试验期间每月一次采集血样，分别检测血清中IL．2和IFN吖的浓度。 1．3犬Ⅱ五和T干扰素EusA试验操作程序 每孔25“l； ’ 1．3．2每孔加入生物素标记抗体25山，轻轻混匀30秒，室温孵育30mjn： 1．3．3洗液l：40稀释，洗板3次； 1．3．4每孔加入50“lm乇P，轻轻混匀30秒，室温孵