实验五 大肠杆菌与沙门氏菌.pptVIP

实验六 细菌生化特性试验 扬州大学兽医学院 * 实验原理 各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，生化试验是极其常用的一种方法。 一、目的要求 学习常用的生化实验方法； 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。 个体为杆状 散在或成对 G－ 二、背景知识介绍 大肠杆菌 中等大小 0.4-0.7×2-3μm 大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原； 与广泛的兽医临床病征有关，如： 犊牛的肠道感染和水泻； 幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病； 狗的尿道感染； 鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、 气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等。 伤寒沙门氏菌 鼠伤寒沙门氏菌 除雏沙门和鸡沙门氏菌外， 其余各菌具有周生鞭毛。 三、实验材料 常规接种工具：接种棒、酒精灯等 革兰氏染色液、玻片、滴管 等 菌种: 大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组） 沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组） 大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物； 大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。 培养基： 三糖铁斜面（1支/人） 生化管： 葡、乳、麦、甘、蔗、H2S 、尿、枸（1套/人） 试剂： 吲哚试剂、M.R试剂、V-P试剂 等 四、实验内容 观察 大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现； 大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现； 沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现； 沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现； 大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检； 记录结果。 三糖铁琼脂接种 挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面； 置 37℃培养。 生化管接种培养 糖发酵试验： 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S试验； 尿素酶试验； 枸橼酸盐利用试验。 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸 大肠杆菌 沙门氏菌 大肠杆菌 沙门氏菌 置 37℃培养 吲哚试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37℃培养3-5d； 静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂1mL； 上层变为红色者为阳性反应。 乙醚 混匀 分层 吲哚试剂 阳性 阴性 吲哚试验原理 蛋白质中的色氨酸 有些细菌 如大肠埃希氏菌 吲哚 对位二甲基氨基 苯甲醛 + 玫瑰吲哚 红色 ① 试剂配方一： 对二甲基氨基苯甲醛 1g 无水乙醇 95mL 浓盐酸 20mL ② 试剂配方二： 对二甲基氨基苯甲醛 5g 戊醇（或异戊醇） 75mL 浓盐酸 25mL 先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。 M.R试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培养3-5d）； 于培养物中加入几滴试剂； 变红色者为阳性反应， 桔红到黄色则为阴性。 M.R试剂 阳性 阴性 V-P试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培养3-5d）； 于培养物中加入0.5mL V-P甲液； 随后加V-P乙液0.5mL，轻摇； 静置10-15min。 15min内变红者为阳性。 V-P甲液 V-P乙液 阳性 阴性 M.R与V-P试验原理 M.R试验： 甲基红是一种pH指示剂： 当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时； 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。 pH 4.4 - 6.2 红 → 黄 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇 某些细菌能发酵 二乙酰 碱 V-P试验： + 胨中的胍基化合物 注意：通常M.R和V-P试验是密切相关： 如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。 粉红色化合物 + M.R试剂 V-P试剂 甲基红 0.02g 95％酒精 60mL 蒸馏水 40mL 甲液：α萘酚酒精溶液 （α萘酚5g无水乙醇100mL） 乙液：KOH溶液 （KOH 40g，水100ml） 将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。 五、结果观察 大肠杆菌的生长表现 普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约2~3mm； 麦康凯：琼脂上形成红色菌落较大的菌落。 三糖铁琼脂 斜面 产酸（黄色） 底部 产酸（黄色） 产气 ＋ H2S － 反应模式表示： A／A ＋；－ * * 三糖铁琼脂(TSI)成分： 　　蛋白胨 20.0g 　　牛肉膏　3.0g 　　乳 糖 10.0g 　　蔗　糖 10.0g 　　葡萄糖　1.0g 　　硫酸亚铁铵(含6个结晶水)