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肾炎冲剂中黄芪甲甙含量测定 肾炎冲剂中黄芪甲甙含量测定 更新日期：2011-09-22 点击： 芮春兰　王龙 提要　本实验采用薄层扫描法测定了肾炎冲剂中黄芪甲甙的含量。方法简单，重现性良好。平均变异系数　CV=2.57%，平均回收率 =97.1%。 关键词　肾炎冲剂；　黄芪甲甙；　薄层扫描 中图分类号：R284.2　　文献标识码：A　　文章编号：1008-0805(2000)03-0214-02 　　肾炎冲剂是南京济民医院临床用于治疗肾炎的有效制剂。具有服用方便，疗效显著等优点。主要由黄芪、小青草、甘草等成分组成。本实验研究了其中的主药黄芪的定性、定量，以控制药品的内在质量。 1　仪器、药品及试剂 1.1　仪器：Cs-930薄层扫描仪(日本岛津)，微量进样器(上海安亭微量进样器厂)，硅胶G板(自制，厚约0.2～0.3 mm，105℃活化1 h)，薄层色谱缸(北京玻璃缸厂)。 1.2　药品：均由南京市济民医院中药库房提供，由该院中药房主任顾宝新鉴定为正品，符合1990年版《中国药典》。 试剂：黄芪甲甙对照品(购于南京药物研究所，纯度99.2%)，其余所用试剂均为分析纯。 2　肾炎冲剂的制备： 2.1　水提取→醇沉→清膏 2.1.1　取雷公藤不去根皮的根，加水12倍量冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水10倍量煮沸45 min，过滤。合并滤液浓缩至1∶1，加乙醇使含醇量达75%，冷藏36 h后抽滤，滤液回收乙醇至无醇味即得清膏A。 2.1.2　取小青草加水15倍量，冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水12倍量，煮沸0.5 h后过滤，合并滤液，浓缩至1∶1。 2.1.3　取黄芪、甘草等余药加水12倍量，冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水10倍量煮沸45 min，过滤。合并滤液再与2.1.2中所得滤液合并，浓缩至1∶1，加乙醇使含醇量达60%，冷浸36 h后抽滤，滤液回收乙醇到无醇味即得浸膏B。 2.2　冲剂的制备：合并清膏A＋B，浓缩至相对密度1.25(60℃测)，加辅料制软材，14目筛挤压制粒，≤70℃干燥，12目筛整粒，分装(10 g/袋)即得。 3　黄芪甲甙的含量测定 3.1　实验条件： 　　层析条件：硅胶G板。 　　展开剂［3］：氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)，10℃以下放置取下层液。 　　显色剂［2］：10%硫酸乙醇液，喷雾显色。 　　显色条件［2］：105℃烘7 min，上盖玻板，胶布密封，30 min后扫描。 　　扫描条件［2］：单波长反射法锯齿扫描， λs=510 nm。狭逢1.25 mm×1.25 mm，线性参数 Sx=3。 3.2　对照品液与供试品液的制备 3.2.1　对照品液：精称105℃恒重3 h后的黄芪甲甙10.31 mg，以甲醇溶解并定溶于5 ml容量瓶中，此为对照品液，浓度为2.06 mg/ml。 3.2.2　样品液［3］：称取冲剂50.0 g(研细)，用水饱和的正丁醇提取5次(80，40，40，40，40 ml)，合并正丁醇液，用5% NaHCO3洗涤3次(20，20，20 ml)，再以水洗1次(20 ml)，弃水液，取正丁醇液于水浴上蒸干，用甲醇定容于2 ml容量瓶中取得。 3.2.3　阳性对照品液：取黄芪10 g，加水100 ml冷浸1 h后煮沸1 h，过滤。滤渣加水80 ml煮沸45 min，过滤，合并滤液浓缩1∶1，以水饱和正丁醇萃取5次(10，10，10，10，10 ml)，合并正丁醇液，以5%NaHCO3洗涤3次(10，10，10 ml)，再用水洗涤1次(10 ml)，取正丁醇液，水浴蒸干，以甲醇定容于2 ml容量瓶中即得。 3.2.4　阴性对照品液：按原工艺制备冲剂，缺少黄芪，其他药不变。按样品液提取方法提取。 3.3　薄层层析：精密吸取对照品液5 μl，样品液8 μl，阳性对照样液8 μl，阴性对照品液8 μl，点于同一板上，按上述条件，依上行法展开即得如下色谱图(见图1)。 图1　 1.黄芪甲甙 2.样品液　 3.阳性对照 4.阴性对照 3.4　线性关系：精密吸取对照品液1，2，3，4，5，6，7 μl点同一板上，依上述条件展开，显色，扫描，测得峰面积值，结果见表1。表明黄芪甲甙在1～5 μl之间浓度与峰面积是一条不过原点的直线(见图2)。回归方程是，　Y=443.97　X＋111 7.8，　γ=0.998 24。 图2 表1　标准曲线扫描结果 点样量 峰面积值 点样量 峰面积值 1 212 0.3 2 283 0.34 3 389 0.7 4 471 5.4 5 575 0.61 6 630 9.7 7 656 3.58 3.5　稳定性：取对照品液5　μl点于薄层板上，展开，显色，扫描1次