靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的慢病毒载体对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响.pdfVIP

主堡塞堕丛型苤查!!!!生!旦筮!!鲞笠!翅g堕!』垦业坠强：垒趔!!!!!：Y!!：；!：№：兰 ·585· ·血管夕b*-q-· 靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的慢病毒 载体对血管平滑肌细胞增殖凋亡的影响 邱志兵 陈鑫 薛昊许欢徐明 蒋英硕 汪黎明 肖立琼 【摘要】 目的构建大鼠骨桥蛋白(OPN)基因的shRNA慢病毒表达载体，并观察其对大鼠血管 平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法针对OPN基因的不同部位设计3对shRNA的寡核苷 酸片段，克隆到慢病毒载体PLKO．1中，构建靶向OPN基因的慢病毒载体PLKO．1-OPN—shRNA，检测 并筛选最佳抑制效率的shRNA干扰载体。并将其转染大鼠血管平滑肌细胞，用逆转录一聚合酶链反 OPN 应(RT—PCR)检测VSMCsmRNA表达水平；蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测VSMCOPN蛋 白表达水平；噻唑蓝(MTY)比色法和流式细胞仪检测沉默OPN基因后对VSMC增殖和凋亡能力的 影响。结果靶向OPN慢病毒表达载体构建成功。重组慢病毒载体PL