第8章 酶分子的化学修饰.pptVIP

酶的化学修饰（chemical modification）通过化学基团的引入或除去，使蛋白质共价结构发生改变。 广义：凡涉及共价或部分共价键的形成或破坏，从而改变酶学性质均可看作是酶分子的化学修饰。 酶选择性化学修饰：在较温和的条件下，以可以控制的方式使一种蛋白质同某些化学试剂起特异反应，从而引起单个氨基酸残基或其功能基发生共价的化学改变。 酶化学修饰的目的 1.?研究酶的结构与功能的关系。 酶的活性中心的存在就是通过酶化学修饰来证实的 2.?人为改变天然酶的某些性质，扩大酶的应用范围。 1）提高酶的生物活性（酶活力） 1分子胰凝乳蛋白酶与11分子右旋糖酐结合后酶活力提高30% 2）增强酶的稳定性（热稳定性、体内半衰期） 治疗血栓有显著疗效的尿激酶在体内的半衰期只有2～20min,用PEG、右旋糖酐修饰后，血液中的半衰期从6min提高到35h。 3）消除抗原性。 4）产生新的催化能力。 酰基化反应 最早在烟草花叶病毒的外壳蛋白N-末端发 乙酰化。 生物界普遍存在。 N-乙酰转移酶 甘氨酸/丙氨酸/丝氨酸/甲硫氨酸/天冬氨酸 * * * * * * * * * * * * 由多个?-葡萄糖通过?-1,6-糖苷键形成的多糖 具有较好的水溶性和生物相溶性 可用作代血浆 修饰方法主要有溴化氰法和高碘酸氧化法等。 2 右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯 血浆代用品(Plasma substitute)是一种分子量接近血浆白蛋白的胶体溶液，输入血管后依赖其胶体渗透压而起到代替和扩张血容量的作用，在治疗失血性休克时可节约部分全血。 过程：大分子活化 与酶共价结合 例： 3 具有生物活性的大分子 抗凝血、抗血栓和降血脂等生物学活性 活化方法：溴化氢 由二种多糖交替连接而成的酸性黏多糖  血浆蛋白质是血浆中的天然成分，与其它蛋白在血液中的复合物在血液中被视为“自身蛋白”。 其中人血清白蛋白是目前研究较多的一种重要的酶修饰剂。 修饰方法：戊二醛法，羰二亚胺法等。 4 蛋白质或其它大分子物质修饰酶 亲和标记是根据酶和底物的亲和性，修饰剂不仅具有对被作用基团的专一性，而且具有对被作用部位的专一性，即试剂作用于被作用部位的某一基团,而不与被作用部位以外的同类基团发生作用。 这类修饰剂也称为位点专一性抑制剂。 8.6 亲和标记 亲和标记设计要满足两个条件： 1 亲和试剂应当对活性部位专一性结合 2 亲和试剂必须含有能与某些氨基酸残基起 反应的化学基团 蛋白质的正常配位体、底物和抑制剂的结构都可以作为设计亲和试剂的参考。 光亲和试剂 是一类特殊的亲和试剂 它在结构上除了有一般亲和试剂的特点外，还具有一个光反应基团。 先与酶活性部位在暗条件下发生特异性结合，然后被光照激活后，产生一个活泼的功能基团，能与它们附近基团反应，形成一个共价的标记物。 * 酶分子化学修饰的应用 活性中心的研究 化学修饰法、X-光晶体衍射法、核磁共振。 酶的空间结构研究 采用具有荧光特性的修饰剂，可借助荧光光谱研究，分析各基团在酶分子中的空间分布情况。 采用巯基修饰剂，可了解酶分子中半胱氨酸的数目及分布情况，确定肽链的数目和二硫键的数目。 酶的作用机制研究 了解各种残基及侧链基团在酶催化过程中的作用。 二、 在医药方面的应用 例：大分子修饰提高超氧物歧化酶的稳定性 该酶能保护DNA、蛋白质和细胞膜，使它们免遭超氧负离子的破坏 3. 应用： 如：PEG－超氧化物歧化酶（SOD） PEG－溶血类蛋白质（链激酶、尿激酶等） PEG－天门冬酰胺酶（ASNase） 消除了抗原性 延长了酶在体内的半衰期 又如：用Dextran修饰?-淀粉酶，??－淀粉酶，胰蛋白酶、过氧化氢酶，提高了酶的热稳定性。 化学修饰方法的局限性 扩散速度受限 生物活性降低 修饰剂呈现多种聚合度，选择性不高 * * * * * * * * * * * * * * * * * * 侧链基团修饰 采用一定的方法(一般为化学法)使酶分子的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法 酶侧链基团 组成蛋白质的氨基酸残基上的功能团。有氨基、羧基、巯基、咪唑基、吲哚基、酚羟基、羟基、胍基、甲硫基等 作用 研究各基团的作用及其对酶的结构、特性和功能的影响 (研究酶活性中心的必需基团) 改变酶分子性质，提高实用价值 测定某一基团在酶分子中的数量 获得新酶种 类别 蛋白类酶 核酸类酶 侧链基团：磷酸基，核糖上的羟基，