仙鹤草药材的HPLC指纹图谱的研讨.pdfVIP

仙鹤草药材的HPLC指纹图谱的研究 1 1 2 2 1 2 吴琳华 王晔 孙考祥 刘红梅 纪宏宇 王智勇 1.哈尔滨医科大学附属第二医院药 学部 黑龙江 哈尔滨 150086 2. 哈尔滨医科大学药剂学教研室 黑龙江 哈尔滨 150086 仙鹤草 Agrimonia pilosa Ledeb 也叫龙芽草 是蔷薇科植物龙芽草的干燥地上部分[2] 传统医学认为其主要功效为止血 [2] 现代药理学研究认为其有较强的抗肿瘤活性 国内外的研 究表明 仙鹤草对体外培养的肿瘤细胞及实验动物移植性肿瘤均有抑制或杀伤作用 还可以提 高荷瘤机体的免疫功能 [3 4 5 6 7]仙鹤草含有多种活性成分 [8 9 10 11] 仙鹤草的生药资源分布较广 国内主产于浙江 江苏 湖北 此外 安徽 福建 广东 河北 山东 辽宁 黑龙江等地亦产[2] 朝鲜半岛 日本及原苏联也有分布 作为一种具有抗肿瘤活性的中药 仙鹤草抗癌效果已得到多方面的证实 确立仙鹤草药材适 宜的指纹图谱 对于鉴别药材的真伪及制剂中控制药材的质量 保证中药制剂有效成分含量的 稳定 都将有一定的作用 本文选取了不同产地的仙鹤草药材 建立了其 HPLC指纹图谱 为鉴 别药材和药材的质量控制打下了基础 1 材料与仪器 1 1仪器与试剂 美国 Waters公司高效液相色谱系统 离心机 溶剂过滤器 Water真空抽气 泵 KQ3200E医用超声波清洗器 乙腈 色谱纯 甲醇 优级纯 磷酸 乙酸乙酯 分析纯 超纯水 96%乙醇 1. 2材料 选用仙鹤草药材饮片 来源于江苏 浙江 安徽皖南山区 山东 云南曲靖 黑龙江 河北 2.方法 2 1 色谱条件的选择 采用 Hypersil ODS C18 色谱柱(200mm 4.6mm,5 m) 乙腈-1%磷酸 水溶液为流动相梯度洗脱 检测波长为 280nm 2 2提取方法 样品适量 干燥 加 10倍量水浸泡 1h 煮沸 1h 过滤 残渣加 5 倍量水 煮沸 0.5h 滤液合并 浓缩至 1 1 生药 水 加入 96%乙醇使成为 60%醇沉液 静置过夜 抽滤 滤液加 96%乙醇至醇浓度为 80% 静置 抽滤 滤液回收乙醇 离心 3000rpm/min 除 去沉淀 上清液以甲醇定容 使成为 100mg 生药 /ml 的样品 2 3 试液及样品的配制 取 1ml1mg/ml 生药 的水溶液 以甲醇定容于 10ml容量瓶 使成为 100mg/ml的样品 微 孔滤膜 0.45µm 滤过 2 4 指纹图谱的方法学考察 2 4 1 重现性实验 取同一批药材供试品 5 份 黑龙江牡丹江 以优选的提取方法 流动 相及其梯度进行提取 进样并记录色谱图 计算各色谱峰的相对保留时间及相对峰面积 2 4 2 精密度实验 取一份样品 连续重复进样 5 次 记录色谱图 计算各色谱峰的相对 保留时间及相对峰面积 2 4 3 稳定性实验 取一份样品 分别在 0 2 4 8 12 24 48hr 进样 记录色谱图 计算各色谱峰的相对保留时间及相对峰面积 3. 不同产地仙鹤草药材的指纹谱 取各地的药材供试品 按优选的方法分别进行提取 进样 记录色谱图 并归纳其指纹峰 以 相对保留时间标定特征峰 并计算相对峰面积 4. 结果 4. 1 指纹图谱的重现性