复合免疫制备3种有机磷农药单克隆抗体的技术研究-南京农业大学学报.pdfVIP

南京农业大学学报摇 2009,32 (4):94 99 摇 Journal of NanjingAgricultural University http:/ / nauxb郾njau郾edu郾cn 吴芸茹, 王利民, 娄旸, 等. 复合免疫制备3种有机磷农药单克隆抗体的技术研究 [J]. 南京农业大学学报,2009, 32(4):94 99 复合免疫制备3 种有机磷农药单克隆抗体的技术研究 吴芸茹, 王利民, 娄旸, 刘扬, 胡白石, 刘凤权* (南京农业大学植物保护学院/ 农业部病虫监测与治理重点开放实验室, 江苏 南京 210095) 摘要: 以琢 氨基丁酸和农药中间体为原料合成了甲基对硫磷、 杀螟硫磷和甲基毒死蜱3种有机磷农药人工半抗原 (H1、 H2和H3); 通过活泼酯法将H1、 H2和H3分别交联于牛血清白蛋白 (BSA) 和卵清蛋白 (OVA) 上制备免疫原和包被 原。 以等体积混合的H1 BSA、 H2 BSA和H3 BSA复合免疫BALB/ c小鼠, 采用常规杂交瘤技术制备单克隆抗体获4 株抗上述复合抗原的单克隆抗体, 其中甲基对硫磷 1株 (H9/ A3), 杀螟硫磷2株 (H9/ B3、 C8/ H6), 甲基毒死蜱1株 6 (G7/ F5)。 所获4株抗体的类型及亚类均为IgG1, 轻链均为资链, 间接ELISA法测定腹水效价均高达 1伊10 。 间接竞争 -1 ELISA法测定H9/ A3、 C8/ H6和G7/ F5细胞株的抑制中浓度 (I ) 分别为107郾0、 40郾4 和75郾2 滋g ·L , 且与类似物无 50 交叉反应。 本研究建立了一种可在较短的研制周期内, 通过单次细胞融合获得多种不同农药的单克隆抗体的有效方法。 关键词: 甲基对硫磷; 杀螟硫磷; 甲基毒死蜱; 半抗原; 单克隆抗体; ELISA 中图分类号: S482郾3摇 摇 摇 文献标志码: A摇 摇 摇 文章编号: 1000 2030 (2009) 04 0094 06 Preparation of organophosphorus pesticide monoclonal antibodies against multiple antigens WU Yun鄄ru, WANG Li鄄min, LOU Yang, LIU Yang, HU Bai鄄shi, LIU Feng鄄quan* (College of Plant Protection/ Key Laboratory of Monitoring and Management of Plant Diseases and Insects, Ministry of Agriculture, Nanjing Agricultural University, Nanjing210095, China) Abstract: Hapten of parathion鄄methyl, fenitrothion, chlorpyrifos鄄methyl was synthesized by active ester method, and termed as H1, H2, H3, respectively. Immunogen and coating antigen were prepared by conjugating (H1, H2, H3) with carried protein bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin (OVA), respectively. Four hybridom