慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2.2基因对Kv2.1钾通道及内向整流钾电流的影响.pdfVIP

王竖汪蔓堡瘟麦盆量垦丛垒王煎!坠廛堕!坠题塑堕墅垡：!叁固盟鉴迢：!鲤适道盈内囱墼逋鲤电逋的髭蛔筮!塑 609 慢病毒介导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2．2基因对 Kv2．1钾通道及内向整流钾电流的影响 王晓萍吴蔚邵冰宋平南孙琳 (沈阳医学院沈洲医院心血管一病房，辽宁 沈阳 110002) [摘要] 比，Ad—siRNA-Kir2．2组的IKl减弱，电流密度降低，且电流一电压曲线上移，内向电流(一100 mV)和外向电流(一60mV)均降低。结论慢病毒介导 RNA干扰心房区心肌细胞Kir2．2基因可降低Kv2．1钾通道的表达并抑制内向整流钾电流： [关键词]RNA干扰；心房区心肌细胞；Kir2．2基因；Kv2．1钾通道；内向整流钾电流 [中图分类号】1154[文献标识码]A 病态窦房结综合征是一种常见心律失常，严重影响患者的 生活质量，甚至可导致心源性猝死。尽管电子起搏器、阿托品 蛋白分析试剂盒，碧云天生物科技公司；DMEM培养基，美国 或心迷走神经消融术在治疗该病上有一定的效果，但仍具有使 Hyclone公司；其他试剂均为分析纯。 用或靶向较差的不足，故急需探索有效简单且并发症较小的治 1．2 方法 疗方法¨。o。近年来生物起搏器研究已成为缓慢心律失常治 1．2．1 心房区心肌细胞培养取l～313龄的Wistar大鼠，于 疗领域的新热点。Kv2．1通道是窦房结、心房和房室结兴奋的 无菌环境下剪取心脏，保留心房，并置于预冷的D—Hank溶液中 主要调节蛋白，该通道属于内向整流钾通道，通道是由四个d 漂洗干净。用眼科小弯将组织充分剪碎，加入5倍体积的 亚单位构成的功能性内向整流钾通道，在起搏电位的发生中具 0．08％胰蛋白酶溶液消化3—5min(37。(2)，静置后弃上清，将 有重要作用14’“。Kir2．2基因可编码心脏Kv2．1通道中0【亚单 沉淀再加入约5倍体积0．08％胰蛋白酶及0．1％胶原酶混合 位的基因、6o，故推测可从分子水平对Kir2．2基因进行干扰治 液，将上清液移入离心管，反复吹打至无细胞团块后，用含胎牛 疗，使Kv2．1通道失活，从而阻断其在缓慢性心律失常中的作 000 血清的DMEM培养液终止消化，1r／min离心处理10min， 用，达到治疗病态窦房结综合征的目的。本研究探讨慢病毒介 弃掉上清后将细胞重悬于含胎牛血清的DMEM培养液中，按 导RNA干扰心房区心肌细胞Kir2．2基因对Kv2．1钾通道及内 1×105个／ml将细胞接种于10ml培养瓶中，置于370C，5％ 向整流钾电流的影响。 h更换培养液。 CO，培养箱中进行培养，每8～12 1．2．2 1材料与方法 selector 根据GenBank中Kit2．2序列，利用siRNA sequence 1．1 材料与试剂二甲亚砜(DMSO)、胎牛血清、TritonXl00， 美国Sigma