慢病毒介导RNA干扰沉默Fas基因在脐带间充质干细胞中的表达.pdfVIP

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2018-01-03 发布于北京
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JSouthMed doi ·工475· Univ,2014．34(10)：1475-148010．3969／j．issn．1673—4254．2014．10．15 基础研究王露1，翟玮玮1，杨向荣1，王芳1，李见2，张强3，李玉云4 蚌埠医学院1临床检验诊断学实验中心，3第一附属医院检验科，4临床检验诊断学教研室，安徽蚌埠 233030；2徐州市第四人民医院检验科，江苏徐州221009 摘要：目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术，构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体，建立F勰基因稳定干扰的人脐带间充质得重组慢病毒，通过感染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养人UC-MSCs，使用包装好的慢病毒感染 UC—MSCs，应用Realtime—PCR和Western blotting检测感染后细胞中F船mRNA及蛋白的表达情况。结果经酶切以及基因测 ol 序鉴定证明慢病毒载体构建成功，病毒悬液滴度为3×lTII，ml。Realtime．PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas 表达水平较对照组显著降低。结论慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达。关键词：慢病毒；siRNA；F鹊；脐带间充质干细胞 Lentivirus—mediated stableFas inhumanumbilical genesilencing stemcells mesenchymal WANG LI Lul，ZHAIWeiweil，YANG Xiangron91，WANGFan91，LIJian21Qian93,LI Yuyun4 Clinical and Centd,Clinical and LaboratoryDiagnostic Laboratory,FirstAffiliated HospitaP,DepartmentofLaboratoryDiagnostic Medical 233030，China；2Clinical Fourth 221009,China Medicind,BengbuCollege,Bengbu Laboratory,XuzhouPeople’sHospital,Xuzhou Toconstructa lentivirus-mediatedvectorforRNA Fas andestablishahuman Abstract：Objective interference(RNAa、of umbilicalcord-derived stem with Fas stable Fourshort mesenchymalcells(UC-MsCs)linegenesilencing．Methodshairpin RNA the ofhumanFasmRNAwere