应用RNA干扰技术抑制神经元E3B1基因表达及对轴突生长的影响.pdfVIP

中国脊柱脊髓杂志2008年第18卷第12期cAiMsPJournal and cord·2008，y。f·18，No·12 ofSpiwSpihal 934 1基因 应用RNA干扰技术抑制神经元E3B 表达及对轴突生长的影响 向 强，周 跃，李长青，徐峰，吕宏琳，郑文杰 (第三军医大学新桥医院骨科400038重庆市) 【摘要】目的：探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制神经元E3BI基冈表达及其对轴突生长的影响。方法：选择 点(阴性对照)以及甘油醛一3一磷酸脱氢酶(GAPDH．阳性对照)，用带有neon选择标志和GFP绿色荧光标志的 RNAi质粒．分别转染培养的神经元．在荧光显微镜下观测转染率，经 真核表达载体pGenesil—l构建E381 G418筛选得到单一的转染细胞，并用Westemblot法检测各转染组神经元E3Bl蛋白的表达情况，选出具有最 佳抑制效应的siRNA转染神经元．加人轴突生长抑制物．观测轴突生长情况。结果：成功构建了RNAi质粒，各 mRNA的 组细胞的转染率相近．均为34％左右。与阴性对照组相比，Abill、Abil2和Abil3转染组细胞内E3BI 表达都受到了不同程度的抑制．其中Abil3转染组细胞的E381mRNA和蛋白的表达抑制最为显著，加人轴突 抑制剂后Abil3转染组神经元轴突仍能继续生长。结论：应用RNA干扰技术能高效特异地抑制神经元E381基 因的表达，E3BI基因的表达下调可促进神经无轴突的生长。 【关键词】RNA干扰；E381；神经细胞：轴突 中图分类号：Q786文献标识码：A 文章编号：1004—蛳X(2008)一12—0934—05 InfluenceofRNAinterferenceon ofE381 inculturedcorticalneuronsandneurite expression gene al／／Chinese of and Journal regeneration／XIANGQiang，ZHOUYue。LIChangqing，et Spine Spinal Cord。2008，18(12)：934-938 theinfluenceofRNAinterferenceonculturedneurons，andobservethe 【Abstract】0bjective：To investigate effectsofE3B1 onneurite RNAi sites(nameda8Abil1．A— genesilenceing regeneration．Method·Threetarget identified theE381(NCBI：NM-024397)，an control，named船HK) bii2，Abil3)targeting targetsites(negative and controlGAPDH—Awereselected．卟e vectorswitht