产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选及.ppt

产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选及发酵 第三组：乔丽婷、朱宁宁、 杨黛黛、刘瑞、白明雪、赵柳颖、庞博、 淀粉酶简介 实训步骤 1、产淀粉酶芽孢杆菌的初筛 2、产淀粉酶芽孢杆菌的复筛 3、目的菌株的保藏 4、目的菌株的生长曲线测定 5、目的菌株的发酵 一、产淀粉酶芽孢杆菌的初筛 表一 初筛结果 3.2.6 点接法 将分区划线培养好的菌种用枪头在平板上对称点接同一菌种（即重复）。待菌种生长好后，滴加碘液。观察透明圈。 3.3、镜检3.3.1革兰氏染色 涂片固定→草酸铵结晶染液初染1min→碘液媒燃1min→95%乙醇脱色→蕃红染液复染1min→镜检并记录实验结果3.2.3.2 芽孢染色涂片固定→7.6%的孔雀绿饱和水溶液染色10min→0.5%蕃红复染1min→镜检并记录实验结果。 二、产淀粉酶的芽孢杆菌的复筛 三 产淀粉酶芽孢杆菌的保藏 3.1 实验材料 3.1.1 样品：2号菌悬液 3.1.2 仪器：移液管、酒精灯、试管、接种环、锥形瓶、甘油管、吸耳球、试管架 3.1.3 培养基：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、淀粉、蒸馏水、琼脂 3.2 实验方法 3.2.1 试管斜面保藏：1 打开超净台 2 点燃酒精灯 3 将培养基倒入试管中 4 将其倾斜并固定 5 将2号菌接入试管中（划线法） 6 保藏 3.2.2 甘油管冷冻保藏： 分别取1ml蒸馏水和1ml丙三醇倒入甘油管中，将其灭菌，加入2ml2号菌悬液，保藏 甘油管保藏 试管斜面保藏 四 产淀粉酶芽孢杆菌的发酵及控制 4.1 实验材料 4.1.1 菌种：2号菌悬液 4.1.2 仪器：锥形瓶、移液管、吸耳球、酒精灯、发酵罐、试管、 分光光度计、烧杯、比色皿 4.2 实验方法 4.2.1 种子的扩大培养 4.2.1.1培养基 6g牛肉膏、12g蛋白胨、6g氯化钠、2.4g淀粉、1200L蒸馏水 4.2.1.2 操作方法 4.2.1.2.1 固液接种：挑取菌种接入装有100ml的培养基的锥形瓶中 液液接种：从上一个锥形瓶中取10ml接入装有100ml的培养基的锥形瓶中，再从上一个锥形瓶中各取10ml的菌液分别接入9个锥形瓶中，将9个锥形瓶放入摇床中。 4.2.2 空气过滤器除菌 4.2.2.1 先打开过滤器底部的排污阀，排尽冷凝水，时间控制不少于5min。 4.2.2.2 压力维持在0.11Mpa~0.12Mpa，时间确保在25min~30min之间，在关闭蒸汽阀的同时迅速打开过滤器的进气阀换气，并用压缩空气将过滤器吹干，时间控制在25min~30min之间 4.2.2.3 吹干后，压力维持在0.12Mpa~0.15Mpa之间 4.2.3 培养基的配置及灭菌 4.2.3.1 培养基的配制：250g牛肉膏、500g蛋白胨、250g氯化钠、100g淀粉、0.1ml消沫剂、50L蒸馏水 4.2.3.2 培养基灭菌 4.2.3.2.1 放入培养基后启动电机，慢速搅拌。 4.2.3.2.2 微开夹套排污阀，打开夹套蒸汽阀，保持夹套压力维持在0.11Mpa左右，待培养基预热到95 ℃以上时，停止搅拌，关闭夹套蒸汽阀，开大夹套排污阀。 4.2.3.2.3 培养基温度达到95 ℃以后，缓慢打开进气阀及底阀处的蒸汽阀，同时向罐内进气，待罐压升至0.11Mpa,打开罐面排气阀进行排气。 4.2.3.2.4 调节罐面排气阀，保持罐压0.11Mpa,维持温度在121~123 ℃之间，计时实消20min。 4.2.3.2.5 实消完毕，关闭底阀后关闭底阀出的蒸汽阀。 4.2.3.2.6 在关闭进气阀处蒸汽阀的同时打卡NB型过滤器的出气阀，进行换气，保持罐压在0.05Mpa~0.08Mpa之间。