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ELISA操作技术培训指南 报告内容 IDEXX 试剂盒 ——试剂盒的组成 移液器及吸头 洗涤系统 酶标仪 蒸馏水或去离子水 其它（加样槽、量筒等） 参照酶标仪厂家的说明书。 选择恰当的波长，一般为450nm或650nm，使用630nm和620nm会使对照和样品值都下降，但不影响结果。 在加入终止液后要尽可能早地进行读数（提前打开酶标仪并设计好模板） 使用Xchek进行读数和数据管理。 报告内容 孔内有气泡存在会严重的影响结果 ！！！ ELISA原理 ——间接 ELISA ELISA原理 ——阻断或竞争ELISA ELISA原理 ——抗原捕获ELISA Xchek允许用户按照建立用户自定义方法。 1:5 BVDV Ab 1:10 CAV B.abortus 1:20 MPT * ? 2008 IDEXX LABORATORIES, INC. ? 2008 IDEXX LABORATORIES, INC. ? 2008 IDEXX LABORATORIES, INC. ? 2008 IDEXX LABORATORIES, INC. 徐灵龙 质控及技术服务专员 （010357 IDEXX试剂盒 1 操作问题分析 4 ELISA操作 3 试剂盒的处理 2 包被板 (Coated Plates) 阳性对照 (Positive Control) 阴性对照 (Negative Control) 酶标抗体 (Conjugate ) 底物液 (TMB Substrate) 样品稀释液 (Sample Diluent) 终止液 (Stop Solution) 浓缩洗涤液 (Wash Concentrate) Never mix reagents from different kit lots! Maintenance Calibrate Equipments IDEXX试剂盒 ——自备器材 试剂盒的处理 ——接收试剂盒 检查外包装是否完好； 记录接收日期； 检查批号及效期； 检查内容物； 使用记录； 先进先出原则（FIFO）； 试剂盒的保存。 试剂盒组分的回温； 仔细阅读操作说明书； 记录实验室的温度； 确认反应温度； 确定所用仪器的工作状态。 ELISA操作 ——操作前的准备 ELISA操作 ——样品的处理 样品的类型 血清/血浆样品 肉汁样品 乳汁样品 其他样品：如蛋清、泄殖腔拭子等 ELISA操作 ——样品的处理 样品的质量 避免使用严重溶血的样品。 避免使用脂状的样品。 ELISA操作 ——样品的处理 样品的保存 血清存储在4-7度不能超过3-5天，若更长时间的保存则应存放于-20度或更低温度。 避免反复冻融样品，且冻融样品的混匀亦应注意避免剧烈震荡。 样品在保存中如出现污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后再取上清进行检测。 ELISA操作 ——样品及其它试剂的配制 样品的制备 1：2 稀释 1: 5 稀释 1: 10 稀释 1: 20 稀释 1: 40 稀释 1：100稀释（两步进行） 1：500稀释（两步或三步进行） 洗涤液的配制 对照的处理（是否需要稀释） ELISA操作 ——移液技术 检查移液器的滴头。 取样量要严格。 要避免加在孔壁上部，不可溅出。 要减少第一个样品和最后一个样品加入到板内的时间差距。应记住在取每一个样品前必须更换吸头。 ELISA操作 ——孵育反应 孵育反应是影响测定结果的一个重要因素，这一步也是ELISA实际操作中容易出现问题的地方。 过夜孵育时应保证反应板的密封。 室温孵育时，应保证温度在20-25℃之间，不应超过25℃。避免把反应板放在阳光下或空调风口处。 37℃孵育时应保证足够的反应时间。 ELISA操作 ——控制反应时间 多块板的操作 板之间的适当的时间间隔 每块板一个计时器 ELISA操作 ——反应板的洗涤 手工洗板 洗板之前标记每个板条 彻底甩掉孔中液体，在吸水纸上拍干 加入下一试剂前避免孔干燥 洗板机洗板 检查设备的性能 清洗和保持 核对内容物以确定洗涤剂的数量 ELISA操作 ——读板及数据管理 IDEXX实验室操作规范 加样顺序： 待检样品说明（或检验目的）： 效期： 批