应用新型成胶立体培养类瘢痕组织.pdf

1100 增强自主创新能力 促进吉林经济发展 应用新型成胶立体培养类瘢痕组织 侯 宜1许侃2孔令坤1 (1吉林大学再生医学科学研究所；2吉林大学第一医院长春130021) 摘 要：目的：选用海藻酸钠凝胶为载体体外培养真皮成纤维细胞，观察真皮成纤维细胞在体外分化 增殖及形成类瘢痕组织的能力：评价海藻酸钠凝胶作为载体培养成纤维细胞的可行性。方法：选用成纤维 细胞为种子细胞，选用海藻酸钠水凝胶作为细胞生长的三维支架，将细胞在体外进行三维培养。结果：成 纤维细胞在凝胶中不仅可保持其正常的细胞形态而且具有稳定的生长增殖功能，培养12天形成的组织 物类似于瘢痕组织，凝胶体透明度随之降低。结论：以我们探索的成胶方式制备的海藻酸盐凝胶可作为成 纤维细胞体外培养的三维培养系统，以此进一步构建类瘢痕组织。 关键词：海藻酸盐凝胶 成纤维细胞瘢痕 瘢痕是人体对创伤产生愈合反应的结果．它们都以成纤维细胞增殖并分泌细胞外基质、导致胶原的 合成和沉积为特征。多数学者认为成纤维细胞是瘢痕形成的效应细胞，在瘢痕形成过程中起主导作用。近 年来，随着细胞体外培养技术的建立和完善，使我们能够把组织中的成纤维细胞分离出来，在体外可控条 件下研究其一系列生物学活动。 1材料和方法 1．1成纤维细胞的分离、培养和扩增 按照本实验室建立的方法建立成纤维细胞库，并以MTr法连续测量细胞活力，依所得数据绘制细胞 数一时间细胞生长曲线，同时，测定几种生长因子对成纤维细胞增殖影响因素的分析。 1．2海藻酸钠凝胶的制备 将不同CaCl：溶液与海藻酸钠混和均匀后，根据凝胶浓度判断成胶的情况和成胶的时间。 1．3 海藻酸钠凝胶基质支持的成纤维细胞三维培养 经胰酶消化获得的成纤维细胞按照1xl凹孔接人海藻酸钠凝胶的24孔培养板中(O．5ml／：子l,)，每孔加入 含10％小牛血清的DMEM培养基继续培养，每2天换液一次。经时观察细胞在凝胶中的生长状况以及凝 胶块的收缩情况。用倒置显微镜(Olympus—IX70型)微调旋钮进行厚度和直径测量，将聚焦平面由凝胶块 顶部调至板底，此间距离减去板底自身的厚度，即为凝胶块的厚度。凝胶块的收缩程度以其占最初厚度的 百分率表示，或用透明坐标纸测定凝胶块的最大直径和最小直径，计算出两者的平均值，收缩程度以气占 最初直径的百分率表示。 吉林省第四届科学技术学术年会 110l 2 结果 2．1 Fb的生长曲线 0．8 _． 0．7 ／／ O．6 ， 臣0．5 | 蚤0．4 小 吝0．3 I 。0．2 ／ O．1 ●——J O 0 5 10 15 培养时间(天) 图l FB的生长曲线 2．2 bFGF、EGF等生长因子对Fb增殖影响 测定结果显示，在常规培养液中，加入EGF、bFGF时，Fb的增殖活性较对照组均有不同程度的增加，呈 d。 2．3 成纤维细胞在海藻酸钠凝胶中的三维培养 海藻酸钠水溶液与成纤维细胞悬液初混和是呈透明状态，加入氯化钙凝胶化后变得不透明并形成有 一定硬度的凝胶块状，其质地颜色近似于真皮组织，当凝胶块收缩后与培养板壁分离，以近似圆盘状悬浮 与培养液的表面。 在倒置相差显微镜下观察细胞的形态，可以清楚的看到成纤维细胞以相对固定的形式分布于凝胶块 的各个层次。成纤维细胞在凝胶内的位置相对的固定不变，则可证