无精症患者睾丸组织中PIWI蛋白研究.docVIP

精品论文 参考文献 无精症患者睾丸组织中PIWI蛋白研究 翟凌云 王利权 (浙江大学医学院附属第二医院妇产科 310000) 【摘要】 目的：为了明确成年男性无精症的发生与PIWI蛋白的关系。方法：收集2014年6月份至2015年4月份于浙江大学医学院附属第二医院妇产科就诊的11例为非阻塞性无精子症患者和11例为阻塞性无精症患者的睾丸活检标本。用免疫组化的方法显示两组患者生精细胞中的PIWI1蛋白浓度差异。结果：阻塞性无精子症患者睾丸组织中PIWI1蛋白的表达明显高于非阻塞性无精子症患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：人类男性无精症的发生与PIWI/piRNA路径有关，提示PIWI/piRNA路径可能在正常精子发育的过程中起重要的保护作用。 【关键词】 无精症;PIWI;piRNA;精子发育 【中图分类号】R715.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）34-0380-02 在已婚人群中有将近10%～15%的夫妇存在着不孕。不孕症不但是一个家庭问题，更是一个社会问题，它严重影响了夫妇的身心健康。引起不孕的夫妇双方因素中男性因素占了将近一半。在男性因素引起的不育中，无精子症大约占了10％。 为了更好的了解精子发生机制，阐明睾丸精子发生的基因表达调控，从而在根本上解决无精子症患者的生殖健康问题，许多研究者进行了不懈的努力。近年来，RNA生物学倍受研究者的广泛关注，尤其是一些非编码小RNA（non-coding RNA，ncRNA）分子，这些ncRNA参与调节细胞生长和发育的重要生理过程。一类新型小分子调控RNA，因其能与PIWI亚家族蛋白结合，故命名为piRNA（PIWI-interacting RNA），通过与PIWI亚家族蛋白结合形成piRNA复合物来调控精子发生过程中的基因表达[1]。 PIWI蛋白质特异性地在动物生殖系细胞中表达，特异性地结合piRNA，在生殖细胞发育和配子生成过程中发挥多种重要功能[2]。遗传学研究表明生殖细胞的维护需要PIWI亚家族蛋白,以及PIWI亚家族蛋白在独特基因组位点的表遗传激活中起作 用[3]。PIWI亚家族蛋白基因敲除的雄性小鼠存在不育，表明小鼠PIWI蛋白在其精子发生过程中起重要作用[4]。 本研究组旨在通过对无精子症患者睾丸生精细胞中PIWI蛋白表达量的检测，明确非阻塞性无精子症患者与阻塞性无精症患者的睾丸生精细胞中PIWI蛋白表达差异。希望阐明piRNA及其PIWI蛋白在人类睾丸精子发生调控中的作用，有助于从根本上解决无精子症患者的生殖健康问题。 1.方法 收集2014年6月份至2015年4月份于浙江大学医学院附属第二医院生殖科就诊的22例无精症男性病人睾丸活检标本，放入液氮中保存，其中11例为非阻塞性无精子症患者，另11例为阻塞性无精症患者。利用免疫组化方法测定无精子症患者睾丸组织中PIWI1蛋白表达的水平。 免疫组化结果判定标准： 将两步法染色切片置于 CH20 型号Olympus显微镜400times;下观察，胞浆或胞膜出现棕黄色为阳性。记数目标部位细胞200个以上，读出其中阴性（－）、弱阳性（+）、阳性（++）、强阳性（+++）的细胞数。阴性（－）：细胞膜或浆 内无棕黄色出现；弱阳性（+）：细胞膜或浆内棕黄色着色较弱；阳性（++）：细胞膜或浆内棕黄色清晰；强阳性（+++）：细胞膜或浆内有明显棕黄色。 再用组织学积分H-Score 方法进行半定量分析。计算公式：H-Score=sum;Pi(i+1)。其中i为染色强度，用1、2、3分别代表（+）、（++）、（+++）。Pi 代表同一染色强度的阳性细胞数占待测细胞总数的百分比，即Pi=i阳性细胞数times;100/待测细胞总数。1为纠正系数。 2.结果 发现阻塞性无精子症患者睾丸组织中PIWI1蛋白的表达明显高于非阻塞性无精子症患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。 3.讨论 为了更好的了解精子发生机制，阐明睾丸精子发生的基因表达调控，从而在根本上解决无精子症患者的生殖健康问题，许多研究者进行了不懈的努力。哺乳动物PIWI/piRNA路径在蛋白编码基因的转录后的调控中起一定的作[5]。piRNA对使转座子沉默，对表观遗传的作用是肯定的[6]。但对于piRNA产生的机制，目前还没有直接的生物化学证据，一个基于生物信息学分析提出逆转录转座子介导的“乒乓模型”假说得到了许多研究者的认同[7]。