镉诱导仔猪睾丸支持细胞氧化酶活性降低及DNA损伤的研究.pdfVIP

生态环境学报 2010, 19(3): 576-579 Ecology and Environmental Sciences E-mail: editor@ 镉诱导仔猪睾丸支持细胞氧化酶活性降低 及 DNA 损伤的研究 1，2 1 1 1 1 1 1* 张明 ，邬静 ，邓思君 ，袁莉芸 ，郭诚志 ，朱丽 ，袁慧 1. 湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128 ；2. 江西生物科技职业学院，江西 南昌 330200 摘要：以仔猪睾丸支持细胞为实验模型，采用二步酶消化法分离支持细胞进行培养。探讨了 0、10、20 、40 、80 µmol·L-1 的 氯化镉对支持细胞的毒性作用。结果表明：10 µmol·L-1 以上的氯化镉有抑制支持细胞生长的作用，并能使支持细胞氧化酶活 性下降，造成支持细胞 DNA 损伤。 关键词：氯化镉；支持细胞；氧化酶；DNA 损伤 中图分类号：X171.5 文献标识码：A 文章编号：1674-5906 （2010 ）03-0576-04 镉是一种重金属,对动物和人具有诱变畸形和 1.3 试验分组和MTT细胞抑制试验 致癌作用,特别是对肾、睾丸、肝等组织具有毒性作 A组为对照组，不含氯化镉的DMEM/F12 。试 -1 用,被美国毒理委员会(ATSDR) 列为第六位危及人 验组为B 、C、D 、E组，分别为含 10 μmol·L 、20 体健康的有毒物质[1] 。它可伴随饲料添加剂氧化锌 μmol·L-1 、40 μmol·L-1 、80 μmol·L-1氯化镉的培养基。 进入动物体内,引起动物繁殖能力下降[2]。由于镉是 24 h后收集细胞进行试验。重复4次。MTT细胞抑制 [5,6] 半衰期很长(20年以上) 的多器官、多系统毒物，容 试验参照文献 。 易蓄积，不易分解，所以对动物、人和食品安全构 1.4 SOD,MDA,GSH-Px的检测 成了渐进性威胁，并且因为镉的残留造成对的环境 SOD、MDA 、GSH-Px的检测的检测参照南京 污染[3] 。镉的生殖毒性的研究大都是对生精细胞。 建成试剂盒检测。 但镉对睾丸支持细胞，特别是猪睾丸支持细胞毒性 1.5 支持细胞DNA损伤的检测 研究国内外罕见报道。本试验以体外培养的仔猪睾 参照Singh[7]的方法,稍加改进。裂解时间延长为 丸支持细胞为实验对象，进行了本研究。 2 h 。解旋时间1 h，电泳时间为40 min 。玻片置荧光 1 材料和方法 显微镜下观察，DNA损伤级别参照Singh方法。每 1.1 仔猪睾丸 组共分级计数400个细胞，(每组做4个平行片，每片 睾丸采自湖南长沙本地3 ～4周龄仔猪,置于冰 计数 100个细胞) 。紫外光激发，DNA 图像成桔红色， 浴PBS液(含双抗600 IU·mL-1) 中，2 h 内送至实验室。 可清楚观察到核DNA和迁移的DNA ，即彗星尾。 1.2 支持细胞的分离、培养和鉴定 用 SPSS 12.0 for Wind