利迪链霉菌初级代谢关键基因的克隆与功能分析研究.pdfVIP

2008年6月 利迪链霉菌初级代谢关键基因的克隆与功 能分析 and Functional Cloning of Analysis Key Genesin Metabolism Pr!mary from Streptomyceslydicus 学科专业：生物化工 研究生：周雍进 指导教师：赵广荣教授 天津大学化工学院 二零零八年六月 摘要 利迪链菌素是利迪链霉菌产生的一种结构全新、抑菌效果明显的新型抗生 素，具有很高的潜在应用价值。然而利迪链菌素的产量低是其应用的限制因素， 加强初级代谢途径，提高其产量是一条可行的途径。本文克隆了利迪链霉菌初级 代谢的几个关键基因，并进行了功能分析。 研究了利迪链霉菌对木糖的利用能力，结果表明利迪链霉菌能利用木糖作为 唯一碳源，但生长比较缓慢。在低浓度葡萄糖培养基上，木糖对生长具有显著促 进作用。从利迪链霉菌中克隆到了木糖代谢的关键基因木酮糖激酶编码基因 xy／B，长度为1446bp，编码481个氨基酸。这表明，虽然利迪链霉菌利用木糖效 率低，但仍然具有木糖代谢的遗传基础。 采用同源克隆策略，克隆了利迪链霉菌葡萄糖代谢途径中的4个基因。葡萄 17 的葡萄糖．6．磷酸结合位点)。葡萄糖激酶编码基因glk,4，长度954bp，编码3 GIkA，PtkAl属于糖激酶，基于广义酸碱催化机理分析，催化活性区域可能分别 为PYLDGERT(326—333位)，CXCGXGCXEXY(168-1 活性区域可能是HLKATMM(254．260位)。 构建了zwfe组成型强表达载体，通过接合转移，将其转化到利迪链霉菌中。 经过筛选鉴定，得到了重组利迪链霉菌。 通过以上糖代谢关键基因克隆与功能分析研究，并构建了川归高表达菌株， 为以后深入研究初级代谢对利迪链菌素生物合成的影响奠定了基础。 关键词：利迪链霉菌，：初级代谢，PCR，木酮糖激酶基因，葡萄糖．6．磷酸脱氢 酶基因，葡萄糖激酶基因，磷酸果糖激酶基因，异柠檬酸脱氢酶基因 ABSTRACT isanovelantibiotic has Streptolydigin produced byStreptomyceslydicus．Ithigh antibacteralwith commercial low activitypotential value．Butthe limits productivity its metabolism application．Enhancingprimary isafeasible to the approachim