利福喷丁脂质体的研制及应用研究.pdfVIP

利 福 喷 丁 脂 质 体 的 研 制 及 应 用 周广治 阮启蒙 饶子超 雷晓林 陈颖 束家有 (武汉大学药学院 430072) 广一平 刘有成 (武汉铁道结核病院 430072) 摘要 目的 制备利福喷丁脂质体作为灌注液 注射液进行临床应用研究 方法 分别用薄膜 法 薄膜超声法制备利福喷丁脂质体 建立比色法测定利福喷丁含量的方法 结合透析法测定利福 喷丁脂质体的包封率及稳定性 采用 Franz改良扩散法测定利福喷丁脂质体分散液的透膜性 考查 利福喷丁脂质体的体外抗菌活性及临床应用 结果 经外观和粒度比较 薄膜超声法是制备利福喷 丁脂质体的较好方法 用该法新制含吐温80的脂质体包封率达72.0%含氮酮的脂质体肺膜透过率 效果好 两种脂质体体外抗菌活性与原药相同 可用于纤支镜灌注 脓胸注射治疗多种结核病 关键词 利福喷丁 脂质体 肺膜透过 纤支镜灌注 利福喷丁又名环戊利福喷丁 作用机理与利福平相同 在体外对革兰氏阳性菌 阴性菌的作用略 低于利福平 但对MTB菌感染比利福平更有效 临床作用强2 10倍 与利福平相比 利福喷丁在长 效和高效上更具优越性 与每周2次给药和每日连续使用利福平的疗效一致 也可与异烟肼合用每周 口服一次 适用于间歇给药治疗肺结核 利福喷丁已经广泛用于治疗肺结核 淋巴结核 结核性脓胸 但由于利福喷丁几乎不溶于水 至 今尚未有其液体制剂报道 国内对利福霉素口服治疗结核和肺部灌注给药治疗技术分别进行了大量的 研究 但至今尚无利福喷丁液体灌/注射新剂型研制 及其用于肺部灌注治疗报道 所以 将利福喷 丁制成脂质体溶液 克服利福喷丁仅用于口服给药的局限 拓宽该类难溶于水的一线抗结核药物现有 剂型不能实现的用途 意义极大 一 实验材料与仪器 卵磷脂 北京双旋微生物培养基制品厂生产 本实验室纯化 胆固醇 上海化学试剂站分装厂 生产 利福喷丁 四川抗生素工业研究所生产 吐温80药用级 氮酮 药用级 人型强毒 结核分支杆菌 HRV北京结核病研究所 6010紫外/可见分光光度计 惠普上海分析仪器有限公 37 司制 透射电镜 日立H-7500透射电子显微镜 武汉大学测试中心电镜室 二 实验方法与结果 1 利福喷丁脂质体的制备方法 薄膜法:将卵磷脂88mg胆固醇16mg利福喷丁20mg及表面活性剂1 滴 吐温80或氮酮 的氯仿溶液于旋转蒸发仪上蒸干 再加入8mlPBS缓冲液水化 在磁力搅拌器上 1 搅拌分散得到利福喷丁脂质体分散液 置于透视电镜下测定脂质体结构形态 薄膜超声法 同薄膜法 得到利福喷丁脂质体分散液后超声5分钟即得 置于透视电镜下测定脂质体结构形态 透视电镜测试结果表明,相同药量 相同表面活性剂时,不同制备方法所制得的脂质体在形态上有 很大差别 用薄膜法制备的含吐温80的脂质体呈圆球形或椭球形 粒度较均匀 但有团聚现象 多为 块状脂质体 见图1a 而薄膜超声法制得的含吐温80的脂质体同样呈圆球形或椭球形 团聚明显减 少 粒径较小 粒度均匀性很好 见图1b 图 1a薄膜法制备的脂质体 透射电镜 100000 1b薄膜超声法制备的脂质体 透射电镜 100000 2 利福喷丁脂质体的包封率及稳定性实验 采用比色法测定利福喷丁含量 在5.0ug/ml 40ug/ml浓度范围内利福喷丁在474nm下的吸光度A与其浓度C呈线性关系 线性回归方程为 A=0.0172C-0.0041 相关系数r=0.9995SD0.0092线性较好 采用平衡透析法分离游离药物和脂质体 分离出的游离 药物在474nm下用PBS作空白测其吸收度 代入回归方程中求出该溶液的浓度 则 包封率 [1- 游离药物 稀释倍数/投料