重组纤维素酶E4酶活性改变的初步研究.pdfVIP

l50 广东农业科学 2013年第 9期 重组纤维素酶E4酶活性改变的初步研究 葛 洪，曹以诚，区镜深，李 军 (华南理工大学生物科学与工程学院，广东 广州 510006) 摘 要：纤维素酶E4是一种噬温的丝状土壤放线菌 Thermomonospora ca分泌的一种特殊纤维素酶 ，对细菌微结晶纤维素 (BMCC)有较高的活性，可与 co中典型的外切酶和内切酶协同作用。初步研究显示 ，其不同底物水解活性与结合域 (CBD)有 很大关系，因此对 E4的CBD进行删除 ，构建4组重组质粒 ，转入酵母GS115表达系统表达 ，得到对应重组蛋白。结果显示 ，CBD的 删除对其温度 、pH稳定性都有影响，且不同底物的降解活力有明显变化 ，对于纤维素酶降解机理复杂性有初步研究。 关键词：纤维素酶；结合域；重组质粒 ；酵母GSI15 中图分类号 ：Q814 文献标识码 ：A 文章编号：1004—874X(2013)09—0150—05 Preliminarystudyonenzymeactivityof changesrecombinantcellulaseE4 GEHong，CAOYi-cheng，OUJing-shen，LIJun (SchoolofBioscienceandBioengineering,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510006，China) Abstract：Cellulose E4 isa specialcellulase from Thermomonospora c吼 which has relatively high activity on bacterial microcrystallinecellulose (BMCC)andsynergizeswithbothclassesofexocellulasesandwithendocellulases，buttheotherendocellulases rfom c口donotsynergizewitheachother．Initial studiesshowedthatdifferentsubstratehydrolysisactivityhadagreatrelationship withbindingdomain (CBD)．SowedeletedtheCBDandconstructedfourrgoupsofrecombinantplasmids，transferredthemtotheyeast GS115expressionsystem，togetthecorrespondingrecombinantprotein．TheresultsshowedthatthedeletionoftheCBDhadalleffecton thetemperature，pH stability，and differentsubstrate dergadation vitality．And revealthe complexity ofthe cellulase degradation mechanism． Keywords：cellulase；bindingdomain；recombinantplasmid；yeastGS115 Thermomonospora c口是一种噬温 的丝状土壤放线 开端有长远意义 。 目前 主要采 用 的酵母有酿酒 酵母 菌 ，产 6种结构功能不同的纤维素酶 ，所有的酶具有中度 (Saccharomycescerevisia)和毕赤酵母 (Hchiapastoris)。酿 热稳定性和宽pH值范围。E4是 Tf．usca分泌的一种特殊