水牛体细胞核移植电融合影响因素的研讨.pdfVIP

第十二届全国动物繁殖学术讨论-av论文集 水牛体细胞核移植电融合影响因素的研究 陆凤花石德顺一 韦英明谢英陈自宏韦精卫等 (广西大学动物繁殖研究所，广西南宁530005) 摘要：本研究主要探讨水牛体细胞核移植电融合的影响因素，以摸索出适合水牛体细胞核移植的 电融合条件。结果显示：直流脉冲前施加2．o、r交流电波能显著提高÷≤15“m供体细胞的融合率及胚 05)，但对其存活率和囊胚率以及20≤+30／-m供体细胞的融合率、胚胎的存活率、 胎的卵裂率(p0 05)，但各组间重组胚的存活率和卵裂率没有显著差异(p0．05)。注核操作液中添加 囊胚率(p0 胚发育率(16 明：(1)直流脉冲前施加2．Ov交流电波能提高直径较小供体细胞的融合效果；(2)融合液中Ca2+浓度 0．1％PVA有利于提高水牛体细胞核移植的效果。 关键词：水牛、体细胞、核移植、电融合、PVA、Ca2+浓度 et 分别在绵羊(Willmut 电融合技术是目前动物核移植的最佳融合 al，1997)、山羊(Baguisi et et et 方法，其原理是在短时间强电场作用下．细胞膜 al，1999)、牛(Shigaal，1999；Wellsal， et et 发生可逆性电击穿，瞬时地失去其高电阻和低通 1999；Kubotaal，2000)、猪(Betthauseral， 透性，然后在数分钟内恢复原状；当可逆性电击 et et 2000；Polejaevaal，2000)和小鼠(Wakayama 穿发生在两个相邻细胞膜的接触区时，则两细胞 al，1998)等动物取得成功。但是，在对小鼠、山 相互融合在一起。因其物理参数可精确固定，故 羊、猪、兔和牛的核移植研究时发现，电融合条件 重复性好．且还可同时激活卵母细胞，因而已被 对核移植胚的融合和体外发育均有明显影响，从 广泛应用。实验也表明，电融合法获得了比病毒 而影响核移植的效率。因为在核移植技术中。融 诱导融合法更高的融合率，且效果稳定。近年 合率越高。则可供培养的核移植胚胎数量也越 来，运用电融合技术进行体细胞的核移植研究已 多，生产出的可用胚胎数就多，这样核移植效率 *基金项目：国家“863”高科技研究发展计划项目(批准号：2002AA206651) cn edu **通讯作者．ardsshi@gxu 作者简介：陆凤花(1973一)，讲师，博士；研究方向：胚胎生物工程 参加本试验的还有杨素芳、胡冰、邵晓云、孟凡丽 ——113—— 第-．p二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 也就越高，可见，重组胚的融合率直接影响着核 连同供体细胞一起注入卵周隙中，使供体细胞与 移植的效率，是核移植技术成功的关键环节之 卵膜紧贴在一起，以便有利于融合。融合时，将 一。为此，对水牛体细胞核移植适宜电融合条件 注核卵母细胞移到电极间的融合滴中并将其摆 进行进一步探讨是非常必要的。因此，本研究采 正，使待融合的两质膜平面与电场方向垂直，然 用水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞作为供体细 后施加2．0v交流电波后．再用100v／ranl直流电 胞．探讨电融