碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中表达图式的研讨.pdfVIP

碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中表达图式的研究* 毛炳宇李艳张红卫 山东大学生命科学学院 【作者简介】毛炳宇，男，博士，原山东大学生命科学学院博士生。 【摘要】研究组织特异性酶在胚胎发育中的表达图式对于研究细胞、组织和器官的 分化具有重要意义。本文以BCIP为底物研究了碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中 的表达图式。在囊胚、原肠胚和神经胚早期(12—13h)未检测到碱性磷酸酶的特异 性表达；到神经胚中期(15h，约6个体节)，碱性磷酸酶在胚胎每一体节的中部开始 18 表达，在胚胎中形成3—6到条纹；／rh神经胚(9—10体节)中，碱性磷酸酶在肌节 中表达；到24h在后部内胚层中也开始表达；在36—48h幼体中，碱性磷酸酶在消化 道中强烈表速，但在咽鳃区不表达，同时在肌节中仍有弱的表达。研究表明碱性磷酸 酶可能在肌节的发育过程中具有一定作用。碱性磷酸酶在消化道中的表达可能与这 一时期消化道开始行使功能有关。为了鉴定文昌鱼碱性磷酸酶的性质，还研究了L 一苯丙氨酸对碱性磷酸酶表达图式的影响，结果表明文昌鱼至少存在两种碱性磷酸 酶：在消化道中表达的一种是肠型的，与脊椎动物碱性磷酸酶可能为同一类型；另一 种主要在肌节中表达，可能是组织非特异性的碱性磷酸酶。以上结果说明文昌鱼早 期发育中碱性磷酸酶的表达与脊椎动物相似，具有时间和组织特异性。 【关键词】文昌鱼胚胎幼体碱性磷酸酶表达 碱性磷酸酶(正磷酸单酯磷酸水解酶，E．C．3．1．3．1)是一类普遍存在的酶，在从大肠杆菌 到人类的所有物种中都存在。这种普遍性说明碱性磷酸酶可能具有基本的生物学功能，但至 今为止碱性磷酸酶在体内的确切功能及其生理底物还不清楚。碱性磷酸酶是一类膜结合糖蛋 白，由一个多基因家族编码，在人类和小鼠中分别有4个和3个活性基因位点。这些同工酶可 通过其热稳定性、电泳迁移率、对不同抑制剂的敏感性及免疫学性质等加以区别。目前人和小 鼠的碱性磷酸酶基因均已被克隆。人和小鼠都具有一种组织非特异性碱性磷酸酶(tissue— alkaline non—specific alkaline 小鼠还分别具有3种和2种组织特异性碱性磷酸酶，包括人的肠碱性磷酸酶(intestinal alkaline phosphatase)、胎盘碱性磷酸酶(placental cellalkaline alkaline phosphatase)；小鼠的肠碱性磷酸酶和胚胎碱性磷酸酶(embryonic phos— phatase)。目前已有关于小鼠碱性磷酸酶表达调控机制的报道。 ST作为国家自然科学基金、国家教委博士点基金、山东省自然科学基金资助项目 ·230·-—— 在脊椎动物早期发育中，碱性磷酸酶的表达具有时间和组织特异性。在小鼠中，碱性磷酸 酶活性首先在4细胞晚期出现于分裂球之间的细胞表面，随后在晚胚泡期的内细胞团和前原 肠期的外胚层细胞中表达。在器官发生时期：碱性磷酸酶在体节中胚层、神经管、肠上皮和原 生殖细胞中均表达。在鸡胚的发育过程中，碱性磷酸酶在胚胎的多种组织中如脑、神经管、脊 索、骨骼等都有表达。在另一种原索动物海鞘中，碱性磷酸酶在原肠晚期内胚层中开始表达， 而在非内胚层组织中仅有微弱的背景表达。随着发育的进行，在内胚层中的表达更为明显而 在其他组织中的表达逐渐消失。因此海鞘的碱性磷酸酶常被用作内胚层分化的标志。 文昌鱼碱性磷酸酶在胚胎发育中的表达图式尚未见报道。颜思旭等曾从成体文昌鱼中分 离得到了一种碱性磷酸酶，并对其动力学、功能基团、分子量及氨基酸组成进行了研究。本文 以BCIP为底物研究了碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎中的表达图式及L一苯丙氨酸对其表达的抑 制作用。结果表明，文昌鱼至少含有两种碱性磷酸酶，其中一种在神经胚中期