阴沟肠杆菌一个内切纤维素酶Cel8A的克隆和功能证实.pdfVIP

网络优先数字出版时间：2014—2—1l 网络优先数字出版地址 ：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／45．1206．G3．2O140211．1616．003．html 广西科学GuangxiSciences2014，21(1)：17--21 阴沟肠杆菌一个 内切纤维素酶 Cel8A 的克 隆和功能 证实* CloningandFunctionCharacteristicsofanEndo’1，4一Ijl— D—glucanaseCel8A Genefrom Enterobactercloacae 陈 燕 。，裴建新 ，郭 媛 ，林丽华 。，黄 日波 庞 浩 一 CHEN Yan一，PEIJian—xin ，GUO Yuan ，IAN Li—hua ，HUANG Ri～bo ，PANG Hao ， (1．广西科学院，非粮生物质酶解国家重点实验室 ，国家非粮生物质能源工程技术研究中心，广西 生物质产业化工程院，广西生物炼制重点实验室，广西南宁 530007；2．广西大学生命科学与技 术学院，广西南宁 530004) (1．GuangxiAcademyofSciences，StateKeyLaboratoryofNon—FoodBiomassandEnzyme Technology，NationalEngineeringResearchCenterforNon—foodBiorefinery，GuangxiBiomass IndustrializationEngineeringInstitute，GuangxiKeyLaboratoryofBiorefinery，Nanning，Guan～ gxi，530007，China；2．CollegeofLifeScience TechnologyofGuangxiUniversity，Nanning， Guangxi，530004，China) 摘要 ：【目的】为 了解决纤维素的酶水解 问题 ，分析能水解纤维素的微生物 的相关基 因。 【方法l从阴沟肠杆菌 (Enterobactercloacae)的基因组数据中挖掘纤维素酶相关基因，发现开放读码框 Cel8A 和纤维素酶基因序列 具有高相似性。利用重组表达技术在大肠杆菌中对 Cel8A基因进行表达，纯化重组蛋 白质并对该蛋白质进行功 能鉴定 。 【结果]CelSA蛋 白质能水解羧甲基纤维素钠 ，它具有 13-1，4一内切葡聚糖酶的水解特性 。Cel8A 的最适 反应 pH值为 7．0，最适温度为 4O℃。 【结论】成功克隆表达阴沟肠杆菌的Cel8A基因，并证实该基 因编码的蛋 白 质具有B一1，4-内切葡聚糖酶活性 ，为进一步研究阴沟肠杆菌的纤维素酶组成以及纤维素降解机理奠定了基础 。 关键词 ：6-1，4一内切葡聚糖酶 酶学特性 阴沟肠杆菌 羧 甲基纤维素钠 纤维素水解 中图分类号：Q8l4，Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1005—9164(2014)01—0017-05 Abstract：[Objective]Theenzymatichydrolysisofcelluloseisaproblem waitingforbeing solved．【Method]In thisstudy，DNA sequencesimilarwithendo一1，4一B—D—glucanasewas screened from the genome data ofEnterobacter cloacae。whereoneDNA fragment(Z8A showedhigh similaritywasfound．ThisDNA wascloned，expressed，and theresultingprotein waspurifiedanditsfunctioncharacteristicswereanalyzed．[Result]ThisCel8Acouldhydrolyze carboxymethylcellulosesodium andshowedtheendo-1，49一D-glucanaseactioncharacteristics． ItsoptimalPH was7．