降温方式对家兔颈总动脉组织形态学的影响研究.pdfVIP

中国工程热物理学会 传热传质学 学术会议论文 编号：083541 降温方式对家兔颈总动脉 组织形态学的影响 郑宇轩 赵 刚* ( 中国科学技术大学 近代力学系 生物力学实验室, 合肥, 230027) ZhaoG@ustc.edu.cn) 摘要：为了更好的提高动脉的冷冻保存效果，本文研究了冷冻过程中降温方式对家兔颈总动脉的影响。 对不同降温方式保存的异体动脉进行组织形态学研究，比较了不同降温速率对低温保存家兔颈总动脉 组织结构的影响。结果表明，i) 在程序低温降温冷冻中，随着降温速率的增加，家兔颈总动脉低温 保存后组织结构所受破坏越大；ii) 玻璃化冷冻保存较程序低温降温冷冻可以更好的保存家兔颈总动脉 组织结构。 关键词：动脉; 玻璃化保存; 低温冷冻；冷冻速率 0 引言 随着修复外科、血管重建手术和冠状动脉旁路移植术等先进医学手段的发展，临床 移植用小弹性动脉近年来供不应求。将血管低温保存，储备大量的源血管，则既可缓解 上述供需矛盾，又可提供充足的时间用于 HLA 配型和疾病检测，因此，血管的低温保 存技术已成为近年来的研究热点[1] 。 在冷冻的过程中，由于冷却速率的不同，经冷冻处理保存的血管，其内皮细胞的死 亡率不同，其收缩舒张能力亦不同。所以探索合理的冷却速率，对提高血管的冷冻保存 效果是十分重要的。 本文选取家兔颈总动脉为模型动脉，通过光学显微镜比较研究了不同降温速率对低 温保存家兔颈总动脉组织结构的影响。 1 动脉组织形态学观测 1.1 动脉取材 3 只新西兰大白兔(2.5~3kg，雌雄不限), 空气栓塞处死。取其左右两侧颈动脉，置 于 4 ℃ Hank’s 溶液，解剖显微镜下去除管壁结缔组织和脂肪。随机分成新鲜组(对照组, 1 根)和低温保存组(5 根) 。并置于4 ℃ Hank’s 溶液，备用。 1.2 动脉玻璃化保存 本研究中，玻璃化保护剂溶液为 VS 溶液，其成份为：基液为 RPMI 1640 细胞培养 液，含有 2.67mol/L 的 DMSO(二甲基亚砜),1.3mol/L 的 PG （1、2—丙二醇）,2.67mol/L 的EG （乙二醇），60g/L 的PEG （聚乙二醇）。 1.2.1 玻璃化保护剂的添加 将动脉从 4 ℃的Hank’s 溶液中取出，依次转移到预冷至 4 ℃的经稀释的玻璃化保护 致谢：本研究受国家自然科学基金(No.和安徽省自然科学基金(No. 070413099)资助。 剂溶液中(1/5×，2/5× ，3/5x，4/5×), 每个浓度下，均置于 4 ℃冰箱平衡 7min.再将单根 动脉和玻璃化保护剂溶液(1×，约 1.5ml) 直径 10mm 容量为 1.5ml 的冷冻管，置于 4 ℃ 冰箱，平衡 7min 左右开始玻璃化保存。 1.2.2 冷冻和复温 冷冻为：将上述冷冻管快速掷入液氮中(经 T 型热电偶测试，在 0~-150℃之间，降 温速率约为 147℃/min) ，并长期保存。 复温过程中，将保存时间不少于 72h 的冷冻管从液氮中取出并快速置于 37℃水浴， 轻轻摇动，至其全部融化。 1.2.3 玻璃化保护剂的去除 复温后，将动脉从玻璃化保护剂溶液中取出，依次转移预冷至 4 ℃的经稀释的玻璃 化保护剂溶液中(4/5×，3/5×，2/5x ，1/5×)和 RPMI 1640 细胞培养液中，4 ℃冰箱中完成， 每步均平衡 7min，再将其转移至4 ℃ Hank’s 溶液中，置于 4 ℃冰箱，备用。所有动脉均 在 4～8 小时内完成力学实验。 1.3 动脉程序降温冷冻保存 本研究中，程序降温冷冻保存保护剂(CPA)溶液成份为：基液为 RPMI-1640 细胞培 养液，含有 1.5M DMSO(二甲基亚砜), 0.2M sucrose (