CMVCreEGFP转基因小鼠的建立.pdfVIP

CMV-Cre．EGFP转基因小鼠的建立 伪俨伢e删转基因小鼠的建立 研究生：王敏 导师：江一平教授 中文摘要 目的：制备转CMV-C_re《罐因小鼠并检测其表达的Cre酶的重组活性。 I、Afl 方法：用Nsi 的DNA片段，稀释成2．9ng／ul的注射用DNA溶液，将其用显微注射的方法直接注入 超排得到的B6D2F：受精卵的原核内，体外培养至2一细胞后，一部分胚胎继续培养， 体外观察转基因的表达情况，其余的移植到假孕ICR母鼠的输卵管内，待其怀孕 产仔后，短波光下观察小鼠是否发出绿色荧光，同时抽提鼠尾DNA，用PCR法检测 仔鼠是否为转基因阳性动物，将转基因阳性子代与基因组上整合有LoxP位点和 介导重组的功能。通过遗传育种的方法获得纯合子小鼠并建系。 结果：共注射了2391个受精卵，继续培养，有1500个胚胎发育至2一细胞， 存活率为62．74％，将1390个存活的胚胎移植N73只假孕ICR母鼠的输卵管内，共 有15只移植母鼠怀孕，得至tJ36只仔鼠，PCR检测表明2只为转基因阳性小鼠，