猪分离卵泡体外培养过程中FasFasL对颗粒细胞凋亡的作用.PDF

动 物 学 研 究 2010，Jun. 31(3) ：268−274 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research DOI ：10.3724/SP.J.1141.2010.03268 猪分离卵泡体外培养过程中 Fas/FasL 对颗粒细胞凋亡的作用 林鹏飞，郝元斌，郭慧利，刘红林，芮 荣* （南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095 ） 摘要：从猪卵巢分离完整有腔卵泡，按质量分为3类：健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡。猪分离卵 泡经眼观检查后再行石蜡切片和HE染色，形态学研究表明，眼观检查对于健康卵泡的判定准确率为92 ％。取健康 卵泡按直径大小分为3组：直径＞5 mm大卵泡组、3～5 mm中卵泡组和＜3 mm小卵泡组。卵泡培养8、16和24 h ， 以Annexin-V FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况，结果发现培养卵泡颗粒细胞的总凋亡率（早期 凋亡＋晚期凋亡）在8 h时就已达到70% 以上，至24 h则为81.1%～94.6% 。收集无血清培养0、8、16、24 、48和72 h 的卵泡颗粒细胞，用real time PCR SYBRgreen法检测各组卵泡颗粒细胞FasL和Fas mRNA相对表达量。各级卵泡 颗粒细胞中FasL mRNA水平随培养时间显著增加，培养至24 h达最大值（P ＜0.05 ）；小卵泡颗粒细胞FasL mRNA 水平均高于大、中卵泡组。各级卵泡颗粒细胞Fas mRNA相对表达量在培养前（0 h ）差异不显著，8 h时显著增加， 48 h达最大值。该实验表明，所用无血清卵泡培养体系可有效诱导卵泡颗粒细胞的凋亡，细胞凋亡是卵泡闭锁的 主要诱因，但卵泡闭锁程度可因卵泡大小而异，小卵泡似乎更容易发生闭锁。 关键词：猪；有腔卵泡；颗粒细胞；凋亡；Fas/FasL 中图分类号：Q959.842 ；Q952.4 ；Q245 文献标志码：A 文章编号：0254-5853-(2010)03-0268-07 Role of Fas/FasL on Apoptosis of Porcine Follicular Granulosa Cells Derived from Isolated Follicles During Culture in vitro * LIN Peng-Fei, HAO Yuan-Bing, GUO Hui-Li, LIU Hong-Lin, RUI Rong (College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China) Abstract: The whole antral follicles were isolated from porcine ovaries and classified as follows: healthy follicles (HF), early atretic follicles (EF) and progressed atretic follicles (PF). The isolated porcine follicles were used for routine histological section and HE staining after examination by eyesight. Morphological research shows that