Cripto1蛋白的表达及多克隆抗体的制备.pdfVIP

摘 要 肿瘤是目前人类的多发病，其死亡率仅次于心血管疾病。肿瘤的发生与细胞 内原癌基因有密切的关系，肿瘤的形成多伴随着原癌基因表达产物的增多。 Cript0．1，也称为畸胎瘤衍化生长因子(teratocarcinoma-derivedgrowch矗lctor-1， 文库中钓取并鉴定的基因。Cripto．1蛋白内部具有标志性EGF．CFC功能结构域， 可与细胞表面多种受体结合行使功能。Cripto．1可作为辅助因子参与TGF．p家族 成员的多个细胞信号通路的传递过程，还参与活化多条控制细胞增殖与凋亡能力 的信号通路。Cripto．1的生物学作用有很多，包括胚胎发育中原肠胚的形成，哺 乳动物乳腺发育和乳蛋白表达，血管发生等。Cript0．1与肿瘤有极高的相关性， 在多种癌细胞和组织中有异常高的表达水平，而在正常的细胞系中则表达量很低 或不表达。Cripto．1在肿瘤细胞的形成、恶变及转移过程中起作用、是公认的原 癌基因。 本研究首先将Cript0．1的功能区，即EGF．CFC结构域基因克隆入原核表达 载体，进而对目的蛋白进行原核表达，在对表达条件进行优化后对表达产物进行 了分离、纯化和复性。并进～步用纯化的蛋白免疫新西兰兔获得兔源多克隆抗体。 之后应用此多克隆抗体对多种人源的肿瘤细胞及正常细胞系中Cripto．1的表达 进行了检测。本研究为进一步探讨Cripto．1的生物学功能及以Cript0．1为靶点的 肿瘤诊断试剂的研发奠定了物质基础。 关键词：C嘶}t0．1；原癌基因；蛋白表达；抗体制备 Abstract inhumallwhosedeathrate1snextto Thmorisa ofcoI彻10ndisease being type aIl in ata cardiopamy．Oncogeneplaysimpo切ntparttumorigenesis，aIldexpresses leVelinsome虹ndsoftumor called Mgh cells．Cripto一1，aslo waSdiscoVeredin1987andwaScloned舶mahuman gro叭hf．actor-1，wllich NTERA2／D1 carcinomacDNA hasEGF—CFCmotifas embryonal 1ibrary．Cripto一1 mnctional isakirldofmembme一嬲sociatedabout domain，w11ich proteiIlweight callnot imeractwith cell-surf．ace alsois 20KD．Cripto．1oIlly many receptors，but i11some to缸1ction船a for m锄bers reported co—rec印torTGF-pf瓤ly signaling are thatcontrolthe and maIlysi印alpathway prolif．erationapoptosis， patllways．There are actiVed isamulti劬ctionalwith wmchalso