KLF4在内毒素血症小鼠中的表达模式及其意义研究.pdf

第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验 KLF4在内毒素血症小鼠中的表达模式及其意义 周智君1，俞远京1，张华莉2，刘俊文2，刘瑛2，肖献忠2 (1．中南大学实验动物学部；2．中南大学湘雅医学院，长沙410078) factor 【摘要】日的为探讨Kruppel样因子4(Kruppel—like4，KLF4)在内毒素血症小鼠中的表达模式 及其对I卜1 水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4的表达；运用生物信息学技术，对启动子区含有KLF4的结合位点 的炎症介质基因进行了预测；运用RT-PCR技术，从mRNA水平探讨内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL-lB的表达 模式。结果显示内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中KLF4 mRNA的表达下调，KLF4蛋白的表达先下调后升高：IL-Ip、 能直接受到KLF4的调控：内毒素血症小鼠肝脏和肺脏中IL-Ip的表达与I(LF4的表达模式呈相反趋势。结论内 毒素血症小鼠各脏器中ELF4表达下调，可能与内毒素血症时的炎症介质泛滥有关，KLF4在炎症介质基因表达 调控中可能具有重要作用。 【关键词】KLF4：内毒素血症；实时荧光PCR：炎症介质；白细胞介素1B：小鼠 factor Kruppel样因子4(Kruppel一1ike4，KLF4)是ShieldsJM等“’于1996年发现的一 种真核锌指蛋白转录因子，因其主要表达在消化道，故又称胃肠富集Kruppel样因子 (Gut—enriched Kruppel—like and 样转录因子(Spl—likeKruppel一1iketranscription 过调控下游靶基因的表达发挥生物学功能，它能够与下游靶基因启动子区的GC盒、CACCC盒和 基础转录元件(basictranscriptionelements)3种结合元件相结合从而调控这些基因的转 录。因此在细胞周期调控、细胞增生分化以及肿瘤形成中发挥重要作用。2吲。最新研究表明，KLF4 可以与组胺酸脱羧酶(histidine 它的表达。组胺酸脱羧酶是催化组氨酸转变为组胺的限速酶，该酶的抑制可减轻组胺的致炎作 用哺。。Feinberg胂等川发现KLF4在巨噬细胞的活化中具有重要的转录调控功能，能促进巨噬 细胞的活化。这些结果提示，KLF4可能是一个可以调节炎症反应的重要转录因子。因此深入探 讨KLF4在炎症中的表达和活性改变及其对炎症介质基因的调控，阐明其在炎症中的生物学功能 鼠为模型，从mRNA和蛋白水平探讨内毒素血症时KLF4在各组织器官中的表达；同时采用生物 信息学方法分析启动子区含KLF4的结合位点的炎症介质基因，并进一步观察了内毒素血症小鼠 各器官组织中炎症介质IL一1p的表达。通过以上研究为揭示KLF4在LPS所致炎症介质表达中 的调控及其机制奠定基础。 l 材料和方法 1．1 材料 供，许可证号scxk(湘)2006-0002。 荧光定量PCR引物和探针由上海 1．1．2引物和探针PCR引物由上海invitrogen公司合成， 闪晶分子生物技术公司合成。PCR引物序列见表l，荧光PCR引物和探针用Primer 328 动物实验 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 Express@Softwarev2．0软件进行设计，序列见表2。 表1 PCR产物系列 1．2 方法 1．2．1 产品)按15mg／Kg的量对小鼠进行腹腔注射，对照组注射相应体积的生理盐水。分别标记为2h， (此时36h组动物全部死亡)采集小鼠肝脏和肺脏，对照组在注射生理盐水后立即采集。将采 集的肝脏和肺脏在生理盐水中漂洗2次后用经0．1％DEPC水处理的冷冻管置液氮中保存。 1．2．2 组织总RNA和总蛋白的提取 ml 将组织在液氮中研碎后，取lOOmg加入，l