大黄鱼血清抗病功能蛋白分析 (1).pdfVIP

第 51卷 第 1期 厦门；学学报 (自然科学版) VoI．51 NO．1 2012年 1月 JournalofXiamenUniversity (NaturalScience) Jan．2012 大黄鱼血清抗病功能蛋白分析 吴志鹏 ，王三英 一 (厦门大学生命科学学 院，福建 厦门 361005) 摘 要 ：利用蛋 白质组学技术筛选大黄鱼(Pseudosciaenacrocea)血清 中的抗病功能蛋 白，通过对 比两组抗病能力差异大 的大黄鱼血清的双向电泳图谱 ，得到了21个显著的差异点 ，并用质谱获得上述差异点肽质量指纹 图谱．进一步检索发现 10号差异点是诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)，其催化产物 NO可结合病原体的特定靶点，协助大黄鱼体 内的免疫系统 共 同抵御病原体人侵 ，显著提高了大黄鱼的抗病能力，所 以 iNOS与大黄鱼抵抗病原体入侵密切相关． 关键词 ：蛋白质组学技术；血清；抗病功能蛋 白；诱导型一氧化氮合成酶 中图分类号 ：Q31 文献标志码 ：A 文章编号 ：0438—0479(2012)01—0121—04 目前对鱼类如何抵御病原体 的机制所知甚少．蛋 1．2 分组及血清样 品处理 白质作为生物体内功能直接执行者 ，无疑是与抗病相 对照组和实验组大黄鱼各 20尾 ，因大黄鱼在室内 关 的主要分子．已有的研究表明，在疾病发生过程或机 难以伺养 ，我们选择在海面废弃 的鱼排进行分组处理． 体康复过程中，血清中与产生疾病或抗病相关蛋 白的 对照组没有进行三联疫苗免疫保护 ，直接用 3种混合 种类和数量会发生相应变化．这些变化可通过蛋 白质 活菌腹腔注射攻击 ，实验组进行三联疫苗免疫保护后 组学技术进行检测．如练惠辉等_】]对 比分析了胆管癌 用 3种混合活菌腹腔注射攻击．收集实验组经攻毒一 病人和正常健康对照组血清蛋 白的双 向电泳 图谱 ，找 周后存活的 17尾大黄鱼血清混合备用，收集对照组经 到了 8种差异蛋 白与胆管癌密切相关．冯钜涛等_2]采 攻毒后一周 内濒临死亡的 19尾大黄鱼血清混合备用． 用双向电泳一质谱技术从血清样品中筛选出 7种蛋 白 血清处理方法是取各组 5肚L混合血清，按质量比1：5 与肝 癌相关．本文选择抗病 能力差异大 的大黄 鱼 加冷丙酮沉淀 3h后离心收集沉淀，沉淀用裂解液 (Pseudosciaenacrocea)血清做进一步分析 ，利用蛋 白 [(9．0mol／L尿素，4 (体积分数)fl-巯基 乙醇 ，1 质组学的高通量和高分辨力对大黄鱼的抗病机制做初 (质量分数)TritonX一100，Tris40mmol／L，0．125 步的分析． (质量分数)SDS，1 (体积分数)两性电解质)]搅拌裂 解 ，溶解后每管取 2O “I直接上样． 1 材料与方法 1．3 双 向电泳 1．1 试剂和仪器