L缬氨酸发酵工艺研讨.pdfVIP

L-缬氨酸发酵工艺研究 蒲广西 陈海宁 孙嘉琳 梁国栋 海南国栋药物研究所有限公司 海口571101 摘 要 目的 L-缬氨酸发酵工艺的研究 方法 从玉米浆浓度 溶解氧 PH值等因素研究 L-缬氨酸发酵产酸量和转化率 结果 控制玉米浆浓度为3.5%溶解氧为2-4之间 PH7.00时 120升发酵罐产酸量达4.0%以上 转化率超过20%结论 必须建立合适的发酵条件 才能提高 L-缬氨酸发酵产酸量和转化率 关键词 L-缬氨酸 菌株 发酵 0 引言 L-缬氨酸属于中性氨基酸 是人体必需氨基酸之一 具有许多生理功能 主要用于配制复 合氨基酸输液 口服液 最近人们发现高纯度的L-缬氨酸是合成一种免疫抗生素的重要中间体 [1] 其价值更高 年消耗量猛增 国内外大批量生产 L-缬氨酸均采用微生物发酵法 熊明勇通过 [2] 诱变选育菌株 发酵培养基的模式识别优化 可积累L-缬氨酸26.38g/L王平等人的利用L- 谷氨酸乳糖发酵短杆菌ATCC13058为出发菌株 经过多次诱变获得一菌株 产酸达3.5%以上[3] [4] 以及陈刚等人改进L-缬氨酸发酵工艺 产酸达3.03.5%国外日本的发酵水平较高 协和制 [5] 药工业化大生产产酸达4%5% 国内L-缬氨酸的产酸水平不断提高 本文作者由黄色短杆菌 ATCC1467选育得到一高产L-缬氨酸的菌株AA-53通过的优化发酵条件 以蔗糖为碳源 硫酸 铵为氮源直接发酵72h120升发酵罐初糖浓度为15%时 进行分批补加蔗糖2%产酸量达4.0% 以上 转化率超过20%达到国内外先进水平 1 材料与方法 1.1菌种 生产L-Val菌种黄色短杆菌AA-53由海南国栋药物研究所有限公司基因室提供 1.2培养基 % 1.2.1完全培养基 蔗糖0.5酵母粉1.0蛋白胨1.0NaCl 0.5琼脂2.0 121 灭菌20分钟 1.2.2种子培养基 蔗 糖 3.0 (NH)SO 3.0 MgSO7HO 0.1 4 2 4 4 2 KHPO 0.1 玉米浆 2.5 L-异亮氨酸 0.025 2 4 CaCO 2.0 VB 0.0005生物素 0.00005 3 1 FeSO7HO 0.001MnSO2HO 0.001 4 2 4 2 121 灭菌20分钟 1 1.2.3发酵培养基 蔗 糖 15.0 (NH)SO 5.0 MgSO7HO 0.5 4 2 4 4 2 KHPO 0.1 玉米浆 3.5 L-异亮氨酸 0.03 2 4 CaCO 3.0 VB 0.00005生物素 0.00005 3 1 FeSO7HO 0.001MnSO2HO 0.001 4 2 4 2 121 灭菌20分钟 1.3方法 1.3.1 酸度计测定PH 1.3.2菌体生长 吸取样品菌液0.2ml加入0.25mol/L盐酸溶液中 混匀后测定A562nm值 1.3.3蔗糖测定 1.3.3.1试剂 Feiling-1 Feiling-2 1%的淀粉溶液 2N的盐酸溶液