骨碎补提取物对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和骨形成功能的影响研究.pdfVIP

骨碎补提取物对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和骨形成功 能的影响 杨 迺 嘉 刘 建 华 贵州省生物技术研究开发基地 贵阳 550002 摘要 目的 研究骨碎补提取物对大鼠成骨细胞增殖和骨形成功能的影响 方法 以大鼠成骨细胞为实验材料 进行碱性磷酸酶 ALP 测定和MTT 测定 结果 6 天后 ALP 的定量测定表明加药组 ALP 水平明显高于对照组 MTT 测定得到了类似的结果 结论 骨碎补提取物对体外培养的大鼠成骨细胞具有 促增殖和分化作用 关键词 骨碎补提取物 成骨细胞 增殖 分化 骨质疏松症是一个正在威胁中老年人健康和生活质量的疾病 已经成为继 高血压 糖尿病后的第三个老年疾病 据统计 目前中国60 ~70 岁的老人有1 3 患骨质疏松症 80 岁以上的女性2 3 患有骨质疏松症 骨质疏松症的防治 对于中国来说 如不及时开展群防群治 骨质疏松症导致的社会负担将大大增 加 而老年人的生活质量也将大大降低 因此骨质疏松症的防治任重而道远 骨 碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei(kunze) J.Sm. 的干燥根茎 始载于 本 草拾遗 为历代常用中药 具补肾 活血 止血 续伤之功用 现代医学研究 发现 骨碎补具有促进内损伤愈合作用 1 骨碎补提取液对小鸡发育生长有显 著的促进作用 用药组股骨的湿重和体积大于对照组 2 45Ca 同位素表示踪法 证明它有促进骨对钙的吸收作用 提高血钙和血磷水平 有利于骨钙化和骨盐 形成 3 本研究主要是在体外环境下 研究骨碎补不同提取物对大鼠头盖骨成 骨细胞的作用 筛选骨碎补防治骨质疏松的有效成分 提供药理实验依据 1 实验材料 1.1 实验细胞与主要试剂 大鼠头盖骨成骨样细胞 由遵义医学院提供 胰蛋白酶 胶原酶 Txtion-x- 100 均为Sigma 公司产品 DMTM 为Gibco 产品 塞唑蓝 MTT 为 上海伯奥生物科技有限公司产品 二甲基砜为上海金山化工厂产品 仙灵骨葆 对照品为贵州仙灵药业公司产品 1.2 实验仪器 TDGCJ- 1 型超净工作台 (上海先锋电器厂) SL-SHELNB CO2 培养箱 美 1 国SHELLAB 公司 SHAC 恒温振荡器 天南地北实业公司 ELX-800 通用 酶标仪 美国 WinooSki Vzrmont 公司 OLYMPUS 倒置显微镜 日本奥林 巴斯公司 7170 型全自动生化分析仪 日本日立公司 GL-20A 低温高速 离心机 (湖南仪器仪表总厂) 1.3 实验动物 Wistar 大鼠 雌性 体重150 ~180g 由遵义医学院实验动物中心提供 2 实验方法 2.1 细胞培养 参照文献方法(4,5,6) 取大鼠 以3 戊巴比妥钠 30mg/kg 腹腔麻醉后 用 75 酒精泡10 分钟 放入超净工作台内 无菌取出头盖骨 置于 D-Hank`s 液 培养皿中 剔除结缔组织 骨膜和血管 经D-Hank`s 液洗涤2 3 次后 剪成 3 0 1mm 大小骨 再用Hank`s 液清洗2 次 经0.2 胰蛋白酶 37 C 恒温振荡消 0 化30 分钟 取出用吸管吹打