骆驼蓬杀线虫活性及作用机理的研讨.pdfVIP

摘 要 本文以采自广东、新疆、湖南的15科28种植物为研究材料，测定了它们对滑 刃目松材线虫及垫刃目南方根结线虫的生物活性，骆驼蓬、黄文江鱼藤、紫花非洲 山毛豆、厚果鸡血藤等植物对供试两种线虫具有强杀线虫活性。其中骆驼蓬的杀线 虫作用突出，1000pg/ml骆驼蓬乙醉提取物对松材线虫24h,48h和72h的校正死亡 率分别为93.86%,95.31%和100%，对南方根结线虫24h,48h和72h的校正死亡率 分别为82.14%,86.46%和98.60%0 建立了线虫忌避活性的室内测定方法。研究结果表明，厚果鸡血藤、火殃勒、 艾篙、马缨丹、黄花高、紫背金盘、了哥王、肿柄菊、黄杜鹃抽提物对南方根结线 虫2龄幼虫具有较为明显忌避活性。 应用超声波提取法，系统研究了10种不同溶剂对骆驼蓬活性成分的提取效果。 从安全性、经济性、提取物的稳定性以及有效成分分离的角度考虑，确定乙醇是骆 驼蓬种子活性成分提取的较好溶剂，超声波提取法提取率为16.35%e 在系统研究的基础上，选取骆驼蓬作为主要研究对象，分离其杀线虫活性成分。 采用液一液分配萃取法和酸水总生物碱提取法，对骆驼蓬种子乙醇提取物进行初步分 离，得到氛仿、石油醚、正丁醉、水以及总生物碱萃取物。对松材线虫、南方根结 线虫生物测定结果表明，杀线虫活性成分主要存在于正丁醇萃取物及总生物碱萃取 物中。以浸溃法处理松材线虫和南方根结线虫48h后，骆驼蓬种子正丁醇萃取物处 理LC”分别为10.18gg/ml和68.70gg/ml;总生物碱处理LCS。分别为177.76Rg/ml和 84.03jig/ml。正丁醇萃取物对南方根结线虫2龄幼虫孵化3d,6d和9d抑制率分别为 63.98%,66.55%和68.60%，与去氢骆驼蓬碱 (HM)抑制作用差异不显著。 骆驼蓬碱 (HL)和去氢骆驼蓬碱 (HM)的室内生物测定结果表明，HL无论是 触杀活性还是抑制卵孵化活性都明显高于HM,HL处理松材线虫24h及48h的LC50 分别为218.69pg/ml和135.74pg/ml，处理南方根结线虫24h及48h的LC5。分别为 142.05ug/ml和84.3即动刀l.HL对南方根结线虫2龄幼虫孵化抑制率处理后6d,9d 和12d均达90%以上，显著优于HM. 将总生物碱进行柱层析分离，获得A,-A:共8个馏分，其中A;析出大量结晶; 生物测定结果表明，各馏分对松材线虫都有一定的触杀活性，其中A,.A6活性较高， A,处理24h和48h的LCs。分别为206.61jig/ml和112.93gg/ml;^处‘理24h和48h 的LC6。分别为160.40肛g/ml和86.02pg/mlo 骆驼蓬种子正丁醇萃取物进行柱层析分离，获得BI-B6共6个馏分，其中馏分 B6对松材线虫具有强的杀线虫活性，200lig/ml处理24h,线虫的校正死亡率达100%; 50即p./ml馏分Bs,B4处理松材线虫24b有强杀线虫活性，线虫校正死亡率均达100%. 松枝水培试验结果表明，骆驼蓬种子正丁醇萃取物、水萃取物能延缓松材线虫病情 发展，对松树具有较好的保护作用和一定的防治效果，可用于防治松材线虫病。骆 驼蓬正丁醇萃取物处理12d内，平均流脂量级别为3.33士0.33,与清水处理差异不显 著，而清“水+虫”处理的平均流脂量级别为4.6710.33。石油醚萃取物、氯仿萃取物对 松材线虫没有明显活性. 以松材线虫为试验材料，研究骆驼蓬碱HL、去氢骆驼蓬碱HM,骆驼蓬总生物 碱Z7粗品、馏分AA6及骆驼蓬种子正丁醇萃取物的作用机理。研究结果表明， 各供试样品对线虫AChE活性具有明显的可逆性抑制作用，对a-酸酪酶活性的抑 制作用高于对 8-竣酸醋酶活性的抑制，对酸性磷酸醋酶有显著的抑制作用，但对碱 性磷酸酷酶活性抑制作用不明显，明显抑制线虫的醋酶同工酶。正丁醇萃取物对 ACNE抑制作用最明显。 经活性成分分离、HPLC检测、室内生物测定以及杀线虫作用机理研究，初步认 为骆驼蓬碱(HL)是骆驼蓬种子中主要杀线虫活性成分之一。 关键词 骆驼蓬 杀线虫活性 松材线虫 南方根结线虫 作用机理 1前言 1.1植物寄生线虫病害与杀线虫剂 线虫是地球上数量最多、抵抗力和适应力最强的无脊椎动物。植物寄生线虫是植 物病害的主要病原之一，几乎全世界所有重要农作物均受其危害，且分布极为广泛， 热带和亚热带地区农作物受害尤其严重