蛋白组学质谱设备.pptxVIP

质谱仪简介;质谱技术： 质谱（ Mass Spectrometry，MS）是带电原子、分子或分子碎片按质荷比（m/z）的大小顺序排列的图谱。 质谱仪是一类能使物质粒子电离为离子并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与否实现质荷比分离，并检测强度后进行物质分析的仪器。 质谱仪主要由分析系统、电气系统和真空系统组成。 ;进样系统;;电子电离源(Electron Ionization EI) 化学电离源(Chemical Ionization , CI ) 大气压光学电离源（ Atmospheric pressure photoionization, APPI） 大气压化学电离源(Atmospheric pressure chemical Ionization, APCI) 电喷雾源(Electron spray Ionization，ESI) 基质辅助的激光解吸电离源（ MALDI-TOF ） ;化学电离(Chemical Ionization) (EI) ;;正离子模式：GH+ + M [M + H]+ + G 负离子模式：[G-H]- + M [M - H]- + G ;Atmospheric-pressure chemical ionization (APCI) 大气压化学电离技术;ESI离子源Electrospray Ionization;Electrospray Ionization (ESI);Taken from /electrospray/.;ESI优缺点;基质辅助激光解吸电离源（MALDI);Matrix-assisted Laser Desorption Ionization (MALDI)基质辅助激光解吸离子化;MALDI Process;Matrix;2013/5/30; 被称做是“软”电离技术，因为：他们在离子化过程中不会破坏分子结构，能实现分子量大于10,000质量单位的生物大分子的质量分析 电喷雾质谱技术和基质辅助激光解吸附质谱技术是诞生于80年代末期的两项软电离技术。这两项技术的出现使传统的主要用于小分子物质研究的质谱技术发生了革命性的变革。它们具有高灵敏度和高质量检测范围，使得在pmol的水平上准确地分析分子量高达几万到几十万的生物大分子成为可能，并得到迅速的发展。;MALDI 与 ESI 的比较;;常用离子源选择依据;Quadrupole (四极杆) Ion trap (离子阱) Time-of-Flight (TOF) (时间飞行) Fourier transform-ion cyclotron resonance (FT-ICR) (傅里叶转换回旋共振） Orbitrap (轨道阱);优点: 1. 是目前分辨率最高的质谱仪, ?1000,000; 2. 可实现多级串联质谱分析, msn; 3. 是目前蛋白质和肽测序中顶端质谱仪; 4. 质量稳定性好; 　　 5. 可实现气相离子-分子反应. 缺点: 1. 有限的动态范围; 2. 存在空间电荷效应和离子-分子反应; 3. 存在Artifact 峰; 4. 多个仪器参数影响质谱图的分布, 如: 活化能, 捕获时间, 检测条件等; 5. CID谱与碰撞能，碰撞气及其他仪器参数有关． 应用: 1. 生物大分子的分析； 　　　2. 有机小分子分析； 3. 离子化学研究； 4. 可以和各种电离技术联用。;Orbitrap是俄国科学家 Makarov发明的一种新型的质谱分析器(2000)。 Orbitrap形状如同仿棰体，由仿棰形中心内电极和左右 2 个外仿棰半电极组成。使离子围绕一中心电极的轨道旋转而被捕获。 当给中心电极逐渐加上直流高压，在 Orbitrap 内便产生特殊几何结构的静电场。当离子进入 Orbitrap 室内后，受到中心电场的引力，即开始围绕中心电极作圆周轨道运动，同时离子受到垂直方向的离心力和水平方向的推力，而沿中心内电极作水平和垂直方向的震荡。外电极除限制离子的运行轨道范围，同时检测由离子振荡产生的感应电势，其水平震荡的频率（?）和离子的质荷比 (m/z) 的关系可由下面方程来描述。从Orbitrap 输出的信号经过微分放大器放大后由快速傅立叶转换变成频谱，频谱再进而转换为质谱图。;三、 常用质量分析器特点;Mass Analyzer; Microchannel Plate （微通道