低剂量辐射LDR对DNAPKcs基因沉默人乳腺上皮细胞DNA修复相关蛋白表达的影响.pdfVIP

低剂量辐射(LOg)对DNA-PKcs基因沉默人乳腺上皮细胞DNA修复相关蛋白表达的影响 摘要 乳腺癌通常指发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤。全世界每年患乳腺癌的妇女多达 120万人，且发病率以每年0．2％～8％的速度上升。在美国，乳腺癌一直处于女性癌症的 第一位，而我国乳腺癌的发病率也有逐年增高趋势，现已位于女性癌症第二位，仅次于 子宫癌，是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤。 手段之一，可减少复发率和死亡率，在乳腺癌治疗中起到了十分重要的作用。但是，放 疗在最大限度地控制肿瘤的同时也会对周围正常组织产生放射旁效应(放疗的副作用)。 放射旁效应主要是指，在对癌细胞DNA作为靶点辐射时，对周围正常细胞D眦成损 dose 伤的效应，即由低剂量放射(10w (double．strand 佳途径，因此，研究低剂量辐射的DNA修复机制具有重要的意义。 proteinkinase，DNA-PK)为主的非同源性末端连接(Nonhomologous 修复和以ATM为主的同源重组(Homologous 张性共济失调症突变基因(atm)编码的一种磷酸化的大分子核磷蛋白，分子量约为 别和修复。尽管ATM介导的HR修复通路可恢复DNA链的连续性，但在哺乳动物细胞 DSBs修复过程中，NHEJ途径起主要作用。 维持端粒结构中起关键作用外，还可磷酸化诸多转录因子和修复因子。近年来研究发现， 敏感性增加，提示它在细胞对LDR进行应答中起到重要的作用，与一些肿瘤的发生发展 具有密切的联系，其作用机制是近年来国际关注的热点。 本研究模拟乳腺放疗中的放射旁效应，以人乳腺上皮细胞系(MCFl0)为对象，首 先研究了低剂量辐射对细胞生长和增殖的影响；然后，检测了不同的DNA损伤修复信号 通路)中主要信号蛋白表达的变化，确定低剂量辐射的信号分子效应；进一步利用siRNA 性以及DSBs修复相关蛋白表达水平的影响，探讨了人乳腺上皮细胞对LDR敏感性变化 低剂量辐射(LDR)对DNA-PK岱基因沉默人乳腺上皮细胞DNA修复相关蛋白表达的影响 后的反应以及DNA修复的机制。实验主要分为两部分： (--)LDR对人乳腺上皮细胞DNA修复相关蛋白表达的影响 殖通路、P13K／AKT介导的生存通路以及Cav．1和NF-r,B等相关蛋白表达水平。 Y射线辐射可引 用明显，提示，乳腺细胞对LDR的敏感性具有剂量依赖性。(2)lOOcGy Y射线 通路的共同作用有关。 结论：LDR能够引起人乳腺上皮细胞DNA损伤，增加细胞的辐射敏感性，其修复机 制是HR和NHEJ通路被激活，细胞增殖和存活相关蛋白也参与LDR引起的损伤修复和调 节。 (二)LDR对DNA．PKcs基因沉默的乳腺上皮细胞DNA修复相关蛋白表达的影响 射细胞，M喊观察LDR对乳腺细胞增殖的影响，Westernblot检测DNA修复相关蛋白 ATM、Ku80和P53等表达的变化。 LDR辐射敏 MCFlopk细胞中DNA．PKcs蛋白表达缺失，导致NHEJDNA损伤修复通路受阻有关。 关键词： 低剂量辐射，非同源性末端连接， 同源重组，DNA-PKcs，ATM II 低剂量辐射(LDR)对DNA-PKcs基因沉默人乳腺上皮细胞DNA修复相关蛋白表达的影响 Abstract Breastcancerisa tumorlocatedinhuman tissue．Allover malignant mammary epithelia frombreast theincidenceis theworldmorethan1．2millionwomensu